CAJ | 학술논문

目的选择PF4和TSP1的高活性片段设计融合基因-TSF,在大肠肝菌表达,细胞水平上检测表达产物的生物学活性.方法PF4的C-末端13肽和TSP1的429～459片断31肽通过Gly-Pro-Gly肽桥设计为融合蛋白-TSF.采用pGEX-2T载体在E.coli JM109中表达TSF蛋白.采用MTT方法测定TSF及其相关物GST-TSF、PF4(58-70)、TSP1(429～459)等对血管内皮细胞、平滑肌细胞、QGY7721人肝癌细胞、HLF人肺成纤维细胞等生长的抑制效应.结果合成的TSF融合基因,克隆到pGEX-2T载体,转化E.coli JM109,获得了TSF蛋白的高效表达.建立了TSF蛋白的纯化复性方法,获得了GST-TSF融合蛋白及TSF蛋白.TSF、GST-TSF、PF4(58～70)和TSP1(429～459)均特异抑制血管内皮细胞的生长,其中TSF的活性最强,活性大小次序为TSF＞GST-TSF＞PF4(58～70)＞TSP1(429～459).结论融合表达蛋白-TSF在细胞水平上能高效特异抑制血管内皮细胞的生长.
목적선택PF4화TSP1적고활성편단설계융합기인-TSF,재대장간균표체,세포수평상검측표체산물적생물학활성.방법PF4적C-말단13태화TSP1적429～459편단31태통과Gly-Pro-Gly태교설계위융합단백-TSF.채용pGEX-2T재체재E.coli JM109중표체TSF단백.채용MTT방법측정TSF급기상관물GST-TSF、PF4(58-70)、TSP1(429～459)등대혈관내피세포、평활기세포、QGY7721인간암세포、HLF인폐성섬유세포등생장적억제효응.결과합성적TSF융합기인,극륭도pGEX-2T재체,전화E.coli JM109,획득료TSF단백적고효표체.건립료TSF단백적순화복성방법,획득료GST-TSF융합단백급TSF단백.TSF、GST-TSF、PF4(58～70)화TSP1(429～459)균특이억제혈관내피세포적생장,기중TSF적활성최강,활성대소차서위TSF＞GST-TSF＞PF4(58～70)＞TSP1(429～459).결론융합표체단백-TSF재세포수평상능고효특이억제혈관내피세포적생장.