浙江大学学报（医学版）
浙江大學學報（醫學版）
절강대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY MEDICAL SCIENCES
2012年
4期
381-385
,共5页
梅宇钦%梁星光%楼宜嘉%俞永平%朱丹雁
梅宇欽%樑星光%樓宜嘉%俞永平%硃丹雁
매우흠%량성광%루의가%유영평%주단안
胚胎性癌干细胞%神经再生%P19胚胎癌细胞%维甲酸%神经分化%表型筛选%体外模型
胚胎性癌榦細胞%神經再生%P19胚胎癌細胞%維甲痠%神經分化%錶型篩選%體外模型
배태성암간세포%신경재생%P19배태암세포%유갑산%신경분화%표형사선%체외모형
目的:建立P19胚胎癌细胞(embryonal carcinoma cells,EC)定向分化为神经样细胞体外模型,用于快速初步确定小分子化合物促神经发生活性.方法:采用单因素变量法进行培养条件探索,考察全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,RA)浓度、悬浮天数、贴壁细胞密度和贴壁后培养液选择对分化的影响.4d后形成的拟胚体经胰蛋白酶消化为单细胞,并建立分阶段确定评价指标,适用于不同时相评价.光镜观察细胞表型,神经元特异蛋白β-tubulinⅢ免疫荧光染色加以确认.结果:P19细胞悬浮培养4d,加入RA(终浓度1μmol/L).以单细胞悬液在1.2×106/ml密度贴壁培养为最佳条件.光镜观察在第8天即有神经元样细胞表型,在第16天可形成神经元样网状结构,两个评价时间点免疫荧光染色均呈β-tubulinⅢ阳性,并与光镜表型相一致.结论:P19细胞分化为神经元样表型,为小分子促神经分化初级筛选提供模型.
目的:建立P19胚胎癌細胞(embryonal carcinoma cells,EC)定嚮分化為神經樣細胞體外模型,用于快速初步確定小分子化閤物促神經髮生活性.方法:採用單因素變量法進行培養條件探索,攷察全反式維甲痠(all-trans retinoic acid,RA)濃度、懸浮天數、貼壁細胞密度和貼壁後培養液選擇對分化的影響.4d後形成的擬胚體經胰蛋白酶消化為單細胞,併建立分階段確定評價指標,適用于不同時相評價.光鏡觀察細胞錶型,神經元特異蛋白β-tubulinⅢ免疫熒光染色加以確認.結果:P19細胞懸浮培養4d,加入RA(終濃度1μmol/L).以單細胞懸液在1.2×106/ml密度貼壁培養為最佳條件.光鏡觀察在第8天即有神經元樣細胞錶型,在第16天可形成神經元樣網狀結構,兩箇評價時間點免疫熒光染色均呈β-tubulinⅢ暘性,併與光鏡錶型相一緻.結論:P19細胞分化為神經元樣錶型,為小分子促神經分化初級篩選提供模型.
목적:건립P19배태암세포(embryonal carcinoma cells,EC)정향분화위신경양세포체외모형,용우쾌속초보학정소분자화합물촉신경발생활성.방법:채용단인소변량법진행배양조건탐색,고찰전반식유갑산(all-trans retinoic acid,RA)농도、현부천수、첩벽세포밀도화첩벽후배양액선택대분화적영향.4d후형성적의배체경이단백매소화위단세포,병건립분계단학정평개지표,괄용우불동시상평개.광경관찰세포표형,신경원특이단백β-tubulinⅢ면역형광염색가이학인.결과:P19세포현부배양4d,가입RA(종농도1μmol/L).이단세포현액재1.2×106/ml밀도첩벽배양위최가조건.광경관찰재제8천즉유신경원양세포표형,재제16천가형성신경원양망상결구,량개평개시간점면역형광염색균정β-tubulinⅢ양성,병여광경표형상일치.결론:P19세포분화위신경원양표형,위소분자촉신경분화초급사선제공모형.
