CAJ | 학술논문

目的体外培养小鼠原代颗粒细胞培养液中,加入不同浓度的抗苗勒管激素(AMH),比较各组间小鼠颗粒细胞上卵泡刺激素受体(FSHR)mRNA的表达情况,探讨体外培养颗粒细胞中AMH与FSHRmRNA表达的关系.方法选取4～5周的昆明雌性小鼠,腹腔注射孕马血清促性腺激素,48～54h后颈椎脱臼法处死小鼠,取双侧卵巢,采用机械分离法释放颗粒细胞,胰蛋白酶消化细胞,低速离心分离细胞,用含15%胎牛血清的DMEM/F12培养基置于37℃、5%CO2培养箱中培养.显微镜观察细胞形态,流式细胞术分离细胞,并用免疫荧光法对所培养的颗粒细胞进行鉴定.同时在体外培养的小鼠原代颗粒细胞培养液中加入不同浓度(5、10、20、30、40ng/mL)的AMH,测定每组培养基中AMH的终浓度,并用荧光定量PCR技术检测每组颗粒细胞中FSHR mRNA 的表达.结果分离培养的颗粒细胞纯度大于80%;随AMH浓度加大,小鼠颗粒细胞中FSHR mRNA的表达逐渐降低,当AMH浓度为 5 和10ng/mL时,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),且5 ng/mL浓度组颗粒细胞上FSHR mRNA的表达量最高.结论用机械分离加胰酶消化加低速离心能得到纯度较高活性很好的颗粒细胞,用FSHR鉴定颗粒细胞是一种简便易行的方法,AMH浓度与颗粒细胞上FSHRmRNA表达呈一定负相关,表明AMH有可能通过抑制FSHR表达降低FSH敏感性,从而参与卵巢早衰的病理生理过程.
목적 체외배양소서원대과립세포배양액중,가입불동농도적항묘륵관격소(AMH),비교각조간소서과립세포상란포자격소수체(FSHR)mRNA적표체정황,탐토체외배양과립세포중AMH여FSHRmRNA표체적관계.방법 선취4～5주적곤명자성소서,복강주사잉마혈청촉성선격소,48～54h후경추탈구법처사소서,취쌍측란소,채용궤계분리법석방과립세포,이단백매소화세포,저속리심분리세포,용함15%태우혈청적DMEM/F12배양기치우37℃、5%CO2배양상중배양.현미경관찰세포형태,류식세포술분리세포,병용면역형광법대소배양적과립세포진행감정.동시재체외배양적소서원대과립세포배양액중가입불동농도(5、10、20、30、40ng/mL)적AMH,측정매조배양기중AMH적종농도,병용형광정량PCR기술검측매조과립세포중FSHR mRNA 적표체.결과 분리배양적과립세포순도대우80%;수AMH농도가대,소서과립세포중FSHR mRNA적표체축점강저,당AMH농도위 5 화10ng/mL시,여대조조비교차이유통계학의의(P<0.05),차5 ng/mL농도조과립세포상FSHR mRNA적표체량최고.결론 용궤계분리가이매소화가저속리심능득도순도교고활성흔호적과립세포,용FSHR감정과립세포시일충간편역행적방법,AMH농도여과립세포상FSHRmRNA표체정일정부상관,표명AMH유가능통과억제FSHR표체강저FSH민감성,종이삼여란소조쇠적병리생리과정.