分子植物育种
分子植物育種
분자식물육충
MOLECULAR PLANT BREEDING
2012年
2期
121-130
,共10页
李亚丽%刘中来%周洁%徐国娟%瞿绍洪
李亞麗%劉中來%週潔%徐國娟%瞿紹洪
리아려%류중래%주길%서국연%구소홍
水稻%mCherry%转基因%T-DNA%整合位点%遗传分析
水稻%mCherry%轉基因%T-DNA%整閤位點%遺傳分析
수도%mCherry%전기인%T-DNA%정합위점%유전분석
为了建立转基因水稻的高通量遗传分析系统,本研究以粳稻成熟胚诱导的愈伤组织为受体材料,潮霉素磷酸转移酶(HPT)为抗性筛选标记,通过农杆菌介导的方法将红色荧光蛋白基因mCherry导入水稻.在水稻转化愈伤组织、转化植株(T0)和转基因后代(T1)均检测到红色荧光,证实mCherry在转基因水稻中稳定表达.139个独立转化株系的遗传分析表明,mCherry在转基因后代表现多种遗传模式,54％的转基因株系呈单位点遗传.TAIL-PCR进一步验证转基因整合到水稻基因组.根据T-DNA整合位点DNA序列分析结果,T-DNA左边界发生碱基缺失、增加和替换,右边界只发生碱基缺失,说明左边界比右边界有更多的碱基变异类型.此外,对T2代植株mCherry和HPT的转录水平进行实时定量逆转录PCR分析,结果表明,mCherry和HPT转录水平因T-DNA在水稻基因组中的整合位置而变化,表现位置效应.本研究在mCherry荧光蛋白和其它相关方法的基础上,为转基因水稻遗传及分子分析建立了一个高效的流程体系.
為瞭建立轉基因水稻的高通量遺傳分析繫統,本研究以粳稻成熟胚誘導的愈傷組織為受體材料,潮黴素燐痠轉移酶(HPT)為抗性篩選標記,通過農桿菌介導的方法將紅色熒光蛋白基因mCherry導入水稻.在水稻轉化愈傷組織、轉化植株(T0)和轉基因後代(T1)均檢測到紅色熒光,證實mCherry在轉基因水稻中穩定錶達.139箇獨立轉化株繫的遺傳分析錶明,mCherry在轉基因後代錶現多種遺傳模式,54％的轉基因株繫呈單位點遺傳.TAIL-PCR進一步驗證轉基因整閤到水稻基因組.根據T-DNA整閤位點DNA序列分析結果,T-DNA左邊界髮生堿基缺失、增加和替換,右邊界隻髮生堿基缺失,說明左邊界比右邊界有更多的堿基變異類型.此外,對T2代植株mCherry和HPT的轉錄水平進行實時定量逆轉錄PCR分析,結果錶明,mCherry和HPT轉錄水平因T-DNA在水稻基因組中的整閤位置而變化,錶現位置效應.本研究在mCherry熒光蛋白和其它相關方法的基礎上,為轉基因水稻遺傳及分子分析建立瞭一箇高效的流程體繫.
위료건립전기인수도적고통량유전분석계통,본연구이갱도성숙배유도적유상조직위수체재료,조매소린산전이매(HPT)위항성사선표기,통과농간균개도적방법장홍색형광단백기인mCherry도입수도.재수도전화유상조직、전화식주(T0)화전기인후대(T1)균검측도홍색형광,증실mCherry재전기인수도중은정표체.139개독립전화주계적유전분석표명,mCherry재전기인후대표현다충유전모식,54％적전기인주계정단위점유전.TAIL-PCR진일보험증전기인정합도수도기인조.근거T-DNA정합위점DNA서렬분석결과,T-DNA좌변계발생감기결실、증가화체환,우변계지발생감기결실,설명좌변계비우변계유경다적감기변이류형.차외,대T2대식주mCherry화HPT적전록수평진행실시정량역전록PCR분석,결과표명,mCherry화HPT전록수평인T-DNA재수도기인조중적정합위치이변화,표현위치효응.본연구재mCherry형광단백화기타상관방법적기출상,위전기인수도유전급분자분석건립료일개고효적류정체계.
