山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2011年
10期
4-6
,共3页
栗刚%吴秀成%钟声%王巍%李媛%刘丹平
慄剛%吳秀成%鐘聲%王巍%李媛%劉丹平
률강%오수성%종성%왕외%리원%류단평
人血管内皮生长因子121%人骨形态蛋白2%腺病毒载体%质粒%基因工程
人血管內皮生長因子121%人骨形態蛋白2%腺病毒載體%質粒%基因工程
인혈관내피생장인자121%인골형태단백2%선병독재체%질립%기인공정
目的 构建人血管内皮生长因子121(VEGF121)与人骨形态发生蛋白2(BMP2)双基因共表达腺病毒载体Adv-BMP2-IRES-VEGF121,并观察其在人胚肾细胞株(HEK293)中的表达情况.方法 对腺病毒质粒pShuttle-CMV-BMP2的目的基因BMP2进行PCR扩增.腺病毒质粒pShuttle-CMV-VEGF121-IRES-hrGFP-1经Kpn I/Xba I酶切后,将BMP2片段定向导入pShuttle-CMV-VEGF121-IRES,构建pShuttle-CMV-V EGF121-IRES-BMP2,并注入大肠杆菌DH5a中扩增,提取质粒.通过酶切分析、PCR检测和序列分析进行鉴定.将构建所得的质粒转染HEK293,采用RT-PCR法检测HEK293中的BMP2、VEGF121 mRNA,Western blot法检测其蛋白.结果 成功构建了Adv-BMP2-IRES-VEGF121.酶切分析及DNA序列测定证实重组质粒构建正确.质粒转染后的HEK293 BMP2和VEGF121表达阳性.结论 成功构建了Adv-BMP2-IRES-VEGF121,其转染HEK293后,VEGF121、BMP2在HEK293中共表达阳性.
目的 構建人血管內皮生長因子121(VEGF121)與人骨形態髮生蛋白2(BMP2)雙基因共錶達腺病毒載體Adv-BMP2-IRES-VEGF121,併觀察其在人胚腎細胞株(HEK293)中的錶達情況.方法 對腺病毒質粒pShuttle-CMV-BMP2的目的基因BMP2進行PCR擴增.腺病毒質粒pShuttle-CMV-VEGF121-IRES-hrGFP-1經Kpn I/Xba I酶切後,將BMP2片段定嚮導入pShuttle-CMV-VEGF121-IRES,構建pShuttle-CMV-V EGF121-IRES-BMP2,併註入大腸桿菌DH5a中擴增,提取質粒.通過酶切分析、PCR檢測和序列分析進行鑒定.將構建所得的質粒轉染HEK293,採用RT-PCR法檢測HEK293中的BMP2、VEGF121 mRNA,Western blot法檢測其蛋白.結果 成功構建瞭Adv-BMP2-IRES-VEGF121.酶切分析及DNA序列測定證實重組質粒構建正確.質粒轉染後的HEK293 BMP2和VEGF121錶達暘性.結論 成功構建瞭Adv-BMP2-IRES-VEGF121,其轉染HEK293後,VEGF121、BMP2在HEK293中共錶達暘性.
목적 구건인혈관내피생장인자121(VEGF121)여인골형태발생단백2(BMP2)쌍기인공표체선병독재체Adv-BMP2-IRES-VEGF121,병관찰기재인배신세포주(HEK293)중적표체정황.방법 대선병독질립pShuttle-CMV-BMP2적목적기인BMP2진행PCR확증.선병독질립pShuttle-CMV-VEGF121-IRES-hrGFP-1경Kpn I/Xba I매절후,장BMP2편단정향도입pShuttle-CMV-VEGF121-IRES,구건pShuttle-CMV-V EGF121-IRES-BMP2,병주입대장간균DH5a중확증,제취질립.통과매절분석、PCR검측화서렬분석진행감정.장구건소득적질립전염HEK293,채용RT-PCR법검측HEK293중적BMP2、VEGF121 mRNA,Western blot법검측기단백.결과 성공구건료Adv-BMP2-IRES-VEGF121.매절분석급DNA서렬측정증실중조질립구건정학.질립전염후적HEK293 BMP2화VEGF121표체양성.결론 성공구건료Adv-BMP2-IRES-VEGF121,기전염HEK293후,VEGF121、BMP2재HEK293중공표체양성.
