CAJ | 학술논문

目的重组表达及纯化人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶(betaine-homocysteine methyltransferase, BHMT)蛋白,制备BHMT多克隆抗体并对其性质进行研究.方法 TRizol法提取人HepG2细胞总RNA,RT-PCR获得BHMT基因,经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切,构建重组表达载体pET-28a-BHMT,经0.5 mmol/L IPTG诱导表达,表达产物通过Ni柱亲和纯化获得重组蛋白;以重组BHMT蛋白免疫兔,获得兔多克隆抗体,并对抗体进行纯化,应用Western印迹方法分析其识别人天然BHMT蛋白的能力.结果经测序证明,RT-PCR得到的人BHMT基因与GenBank中人的BHMT基因完全一致;构建的BHMT原核表达载体可稳定地表达可溶性人BHMT蛋白;重组BHMT蛋白免疫兔后,兔血清抗体纯化获得高纯度BHMT抗体,此抗体可以特异性地识别人肝癌组织中的天然BHMT蛋白.结论成功重组表达并纯化人BHMT蛋白,所获得的BHMT多克隆抗体可以应用于人BHMT蛋白的检测,为研究BHMT在高同型半胱氨酸血症中的作用机制奠定基础.
목적 중조표체급순화인첨채감고반광안산갑기전이매(betaine-homocysteine methyltransferase, BHMT)단백,제비BHMT다극륭항체병대기성질진행연구.방법 TRizol법제취인HepG2세포총RNA,RT-PCR획득BHMT기인,경EcoRⅠ화BamHⅠ쌍매절,구건중조표체재체pET-28a-BHMT,경0.5 mmol/L IPTG유도표체,표체산물통과Ni주친화순화획득중조단백;이중조BHMT단백면역토,획득토다극륭항체,병대항체진행순화,응용Western인적방법분석기식별인천연BHMT단백적능력.결과 경측서증명,RT-PCR득도적인BHMT기인여GenBank중인적BHMT기인완전일치;구건적BHMT원핵표체재체가은정지표체가용성인BHMT단백;중조BHMT단백면역토후,토혈청항체순화획득고순도BHMT항체,차항체가이특이성지식별인간암조직중적천연BHMT단백.결론 성공중조표체병순화인BHMT단백,소획득적BHMT다극륭항체가이응용우인BHMT단백적검측,위연구BHMT재고동형반광안산혈증중적작용궤제전정기출.