昆明医学院学报
昆明醫學院學報
곤명의학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF KUNMING MEDICAL COLLEGE
2010年
9期
7-12
,共6页
Beclin 1%自噬%P13K/PKB%SKOV3细胞
Beclin 1%自噬%P13K/PKB%SKOV3細胞
Beclin 1%자서%P13K/PKB%SKOV3세포
目的 探讨自噬基因Beclin 1在人卵巢癌SKOV3细胞中过表达后自噬相关信号调控通路P13K/PKB途径中Class Ⅰ P13K(p110 α)、p-PKB和ClassⅢPI3K(hvps34)的表达变化以及对肿瘤细胞的自噬活性的影响.方法 将自噬基凶Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞;分别用荧光定量RT-PCR和Westem blot在mRNA和蛋白水平检测用流式细胞仪检测Beclinl、p110α、hvps34和p-PKB的表达;在电镜和荧光显微镜下观察自噬现象,用流式细胞仪检肿瘤细胞自噬情况.结果 pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞Beelinl表达在mRNA和蛋白质水平明显高于转染空质粒pcDNA3.1和未转染细胞;PeDNA3.1/Baelin1转染后hvps34表达上调,而p110α、p-PKB的表达下调.PcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后在在电镜下可见大量自噬囊泡形成.在荧光显微镜下见pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞中MDC阳性细胞明显增加.流式细胞仪检测peDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞MDC平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组.Beclin 1在SKOV3中的过表达后抑制肿瘤细胞在体外的生长,抑制率为58.68%.结论 自噬基因Beclin1在人卵巢癌细胞SKOV3中过表达可使Class Ⅲ P13K(hvps34)表达上调,Class Ⅰ P13K(p110α)及其下游的p-PKB表达下调,诱导肿瘤细胞自噬活性增加,抑制SKOV3在体外的增殖.
目的 探討自噬基因Beclin 1在人卵巢癌SKOV3細胞中過錶達後自噬相關信號調控通路P13K/PKB途徑中Class Ⅰ P13K(p110 α)、p-PKB和ClassⅢPI3K(hvps34)的錶達變化以及對腫瘤細胞的自噬活性的影響.方法 將自噬基兇Beclin 1的真覈錶達載體pcDNA3.1/Beclin1轉染SKOV3細胞;分彆用熒光定量RT-PCR和Westem blot在mRNA和蛋白水平檢測用流式細胞儀檢測Beclinl、p110α、hvps34和p-PKB的錶達;在電鏡和熒光顯微鏡下觀察自噬現象,用流式細胞儀檢腫瘤細胞自噬情況.結果 pcDNA3.1/Beclin1轉染後SKOV3細胞Beelinl錶達在mRNA和蛋白質水平明顯高于轉染空質粒pcDNA3.1和未轉染細胞;PeDNA3.1/Baelin1轉染後hvps34錶達上調,而p110α、p-PKB的錶達下調.PcDNA3.1/Beclin1轉染SKOV3細胞後在在電鏡下可見大量自噬囊泡形成.在熒光顯微鏡下見pcDNA3.1/Beclin1轉染後SKOV3細胞中MDC暘性細胞明顯增加.流式細胞儀檢測peDNA3.1/Beclin1轉染後SKOV3細胞MDC平均熒光彊度高于pcDNA3.1轉染組和未轉染組.Beclin 1在SKOV3中的過錶達後抑製腫瘤細胞在體外的生長,抑製率為58.68%.結論 自噬基因Beclin1在人卵巢癌細胞SKOV3中過錶達可使Class Ⅲ P13K(hvps34)錶達上調,Class Ⅰ P13K(p110α)及其下遊的p-PKB錶達下調,誘導腫瘤細胞自噬活性增加,抑製SKOV3在體外的增殖.
목적 탐토자서기인Beclin 1재인란소암SKOV3세포중과표체후자서상관신호조공통로P13K/PKB도경중Class Ⅰ P13K(p110 α)、p-PKB화ClassⅢPI3K(hvps34)적표체변화이급대종류세포적자서활성적영향.방법 장자서기흉Beclin 1적진핵표체재체pcDNA3.1/Beclin1전염SKOV3세포;분별용형광정량RT-PCR화Westem blot재mRNA화단백수평검측용류식세포의검측Beclinl、p110α、hvps34화p-PKB적표체;재전경화형광현미경하관찰자서현상,용류식세포의검종류세포자서정황.결과 pcDNA3.1/Beclin1전염후SKOV3세포Beelinl표체재mRNA화단백질수평명현고우전염공질립pcDNA3.1화미전염세포;PeDNA3.1/Baelin1전염후hvps34표체상조,이p110α、p-PKB적표체하조.PcDNA3.1/Beclin1전염SKOV3세포후재재전경하가견대량자서낭포형성.재형광현미경하견pcDNA3.1/Beclin1전염후SKOV3세포중MDC양성세포명현증가.류식세포의검측peDNA3.1/Beclin1전염후SKOV3세포MDC평균형광강도고우pcDNA3.1전염조화미전염조.Beclin 1재SKOV3중적과표체후억제종류세포재체외적생장,억제솔위58.68%.결론 자서기인Beclin1재인란소암세포SKOV3중과표체가사Class Ⅲ P13K(hvps34)표체상조,Class Ⅰ P13K(p110α)급기하유적p-PKB표체하조,유도종류세포자서활성증가,억제SKOV3재체외적증식.
