中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2010年
9期
774-777,782
,共5页
李金鞠%任华%王自强%钱旻%杜冰
李金鞠%任華%王自彊%錢旻%杜冰
리금국%임화%왕자강%전민%두빙
Rig-I%Helicase%原核表达%多克隆抗体
Rig-I%Helicase%原覈錶達%多剋隆抗體
Rig-I%Helicase%원핵표체%다극륭항체
目的:为Rig-I蛋白结构与模式识别功能的深入研究提供灵敏、高效的免疫学检测试剂.方法:PCR法克隆小鼠Rig-I基因Helicase区编码序列(726～2 240 bp,编码241～746位氨基酸),构建带组氨酸标签的原核表达载体pET15b-mRig-I-H,阳性克隆经酶切、测序鉴定后转化E.coli BL21进行诱导表达.目的蛋白电泳分离并割胶纯化后免疫家兔制备抗血清.抗血清用ELISA、Western blot、细胞免疫荧光方法进行鉴定.结果:目的蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,制备的抗Rig-I抗体效价达到1∶100 000,Western blot、细胞免疫荧光结果显示该抗体能够有效地对细胞内Rig-I蛋白的表达水平进行检测.结论:成功地对mRig-I-H进行了原核表达、纯化,抗mRig-I-H的多克隆抗体具有较高的特异性,为进一步研究Rig-I尤其是Helicase区的结构与功能奠定了坚实的基础.
目的:為Rig-I蛋白結構與模式識彆功能的深入研究提供靈敏、高效的免疫學檢測試劑.方法:PCR法剋隆小鼠Rig-I基因Helicase區編碼序列(726～2 240 bp,編碼241～746位氨基痠),構建帶組氨痠標籤的原覈錶達載體pET15b-mRig-I-H,暘性剋隆經酶切、測序鑒定後轉化E.coli BL21進行誘導錶達.目的蛋白電泳分離併割膠純化後免疫傢兔製備抗血清.抗血清用ELISA、Western blot、細胞免疫熒光方法進行鑒定.結果:目的蛋白在大腸桿菌中穫得瞭高效錶達,製備的抗Rig-I抗體效價達到1∶100 000,Western blot、細胞免疫熒光結果顯示該抗體能夠有效地對細胞內Rig-I蛋白的錶達水平進行檢測.結論:成功地對mRig-I-H進行瞭原覈錶達、純化,抗mRig-I-H的多剋隆抗體具有較高的特異性,為進一步研究Rig-I尤其是Helicase區的結構與功能奠定瞭堅實的基礎.
목적:위Rig-I단백결구여모식식별공능적심입연구제공령민、고효적면역학검측시제.방법:PCR법극륭소서Rig-I기인Helicase구편마서렬(726～2 240 bp,편마241～746위안기산),구건대조안산표첨적원핵표체재체pET15b-mRig-I-H,양성극륭경매절、측서감정후전화E.coli BL21진행유도표체.목적단백전영분리병할효순화후면역가토제비항혈청.항혈청용ELISA、Western blot、세포면역형광방법진행감정.결과:목적단백재대장간균중획득료고효표체,제비적항Rig-I항체효개체도1∶100 000,Western blot、세포면역형광결과현시해항체능구유효지대세포내Rig-I단백적표체수평진행검측.결론:성공지대mRig-I-H진행료원핵표체、순화,항mRig-I-H적다극륭항체구유교고적특이성,위진일보연구Rig-I우기시Helicase구적결구여공능전정료견실적기출.
