中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2007年
2期
267-271
,共5页
王颖%王生余%侯春梅%徐元基%杜芝燕%于晓妉
王穎%王生餘%侯春梅%徐元基%杜芝燕%于曉妉
왕영%왕생여%후춘매%서원기%두지연%우효담
组蛋白去乙酰化酶抑制剂%SAHA%MAPK%信号转导%细胞凋亡%HL-60细胞
組蛋白去乙酰化酶抑製劑%SAHA%MAPK%信號轉導%細胞凋亡%HL-60細胞
조단백거을선화매억제제%SAHA%MAPK%신호전도%세포조망%HL-60세포
本研究旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂-SAHA(suberoylaniilde hydroxamic acid)诱导人急性髓性白血病细胞株HL-60凋亡的分子机制.采用MTT法,瑞氏-姬姆萨染色和Hoechst33342/PI荧光染色方法,检测SAHA对HL-60细胞生长的抑制作用及细胞的形态变化;通过流式细胞术、Western-blot方法测定HL-60细胞的周期变化以及多种信号蛋白的表达.结果表明:SAHA可以呈剂量时间依赖性抑制HL-60细胞的生长;经2 μmol/L SAHA处理12-48小时,HL-60细胞显示细胞周期被阻滞于G0/G1期;经Hoechst33342荧光染色后细胞核出现明显的凋亡小体结构;Western blot检测证实,SAHA作用HL-60细胞后caspase 3被激活,其底物蛋白聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]发生剪切,细胞发生凋亡;对细胞凋亡相关信号转导通路P44/42 MAPK及PI3K/Akt检测结果表明,涉及MAPK信号通路的Raf及ERK激酶磷酸化受到明显抑制,而Akt及其下游mTOR激酶的活性没有明显改变.结论:SAHA对HL-60细胞的杀伤作用主要是通过诱导细胞凋亡实现,与细胞增殖相关的P44/42 MAPK信号通路被阻断是细胞凋亡发生的机制之一.
本研究旨在探討組蛋白去乙酰化酶抑製劑-SAHA(suberoylaniilde hydroxamic acid)誘導人急性髓性白血病細胞株HL-60凋亡的分子機製.採用MTT法,瑞氏-姬姆薩染色和Hoechst33342/PI熒光染色方法,檢測SAHA對HL-60細胞生長的抑製作用及細胞的形態變化;通過流式細胞術、Western-blot方法測定HL-60細胞的週期變化以及多種信號蛋白的錶達.結果錶明:SAHA可以呈劑量時間依賴性抑製HL-60細胞的生長;經2 μmol/L SAHA處理12-48小時,HL-60細胞顯示細胞週期被阻滯于G0/G1期;經Hoechst33342熒光染色後細胞覈齣現明顯的凋亡小體結構;Western blot檢測證實,SAHA作用HL-60細胞後caspase 3被激活,其底物蛋白聚ADP覈糖聚閤酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]髮生剪切,細胞髮生凋亡;對細胞凋亡相關信號轉導通路P44/42 MAPK及PI3K/Akt檢測結果錶明,涉及MAPK信號通路的Raf及ERK激酶燐痠化受到明顯抑製,而Akt及其下遊mTOR激酶的活性沒有明顯改變.結論:SAHA對HL-60細胞的殺傷作用主要是通過誘導細胞凋亡實現,與細胞增殖相關的P44/42 MAPK信號通路被阻斷是細胞凋亡髮生的機製之一.
본연구지재탐토조단백거을선화매억제제-SAHA(suberoylaniilde hydroxamic acid)유도인급성수성백혈병세포주HL-60조망적분자궤제.채용MTT법,서씨-희모살염색화Hoechst33342/PI형광염색방법,검측SAHA대HL-60세포생장적억제작용급세포적형태변화;통과류식세포술、Western-blot방법측정HL-60세포적주기변화이급다충신호단백적표체.결과표명:SAHA가이정제량시간의뢰성억제HL-60세포적생장;경2 μmol/L SAHA처리12-48소시,HL-60세포현시세포주기피조체우G0/G1기;경Hoechst33342형광염색후세포핵출현명현적조망소체결구;Western blot검측증실,SAHA작용HL-60세포후caspase 3피격활,기저물단백취ADP핵당취합매[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]발생전절,세포발생조망;대세포조망상관신호전도통로P44/42 MAPK급PI3K/Akt검측결과표명,섭급MAPK신호통로적Raf급ERK격매린산화수도명현억제,이Akt급기하유mTOR격매적활성몰유명현개변.결론:SAHA대HL-60세포적살상작용주요시통과유도세포조망실현,여세포증식상관적P44/42 MAPK신호통로피조단시세포조망발생적궤제지일.
