中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2007年
10期
896-900
,共5页
刘华忠%杨兴元%李晴%安晓荣%陈永福%钟杰平%李琨
劉華忠%楊興元%李晴%安曉榮%陳永福%鐘傑平%李琨
류화충%양흥원%리청%안효영%진영복%종걸평%리곤
牛碱性成纤维细胞生长因子%原核表达%活性检测
牛堿性成纖維細胞生長因子%原覈錶達%活性檢測
우감성성섬유세포생장인자%원핵표체%활성검측
采用巢式PCR方法克隆了牛18ku-bFGF基因完整的编码序列,并构建了原核表达载体pET-28a-bFGF,将其转化大肠杆菌BL21,在25℃低温条件下,用0.5 mmol/L IPTG诱导表达5 h,用Ni-NTA亲和纯化细胞裂解上清液,经Western-blotting检测,结果显示,在特定的诱导条件下,重组牛bFGF基因在大肠杆菌中获得了表达,并且主要以可溶性状态存在于细胞中.经检测,纯化后的重组蛋白能显著促进成纤维细胞的增殖(P＜0.05),其活性与商品用重组人18ku-bFGF没有差异(P＞0.05).表明,所获得的可溶性重组牛18ku-bFGF蛋白具有较高的生物学活性,可用于后续研究工作.
採用巢式PCR方法剋隆瞭牛18ku-bFGF基因完整的編碼序列,併構建瞭原覈錶達載體pET-28a-bFGF,將其轉化大腸桿菌BL21,在25℃低溫條件下,用0.5 mmol/L IPTG誘導錶達5 h,用Ni-NTA親和純化細胞裂解上清液,經Western-blotting檢測,結果顯示,在特定的誘導條件下,重組牛bFGF基因在大腸桿菌中穫得瞭錶達,併且主要以可溶性狀態存在于細胞中.經檢測,純化後的重組蛋白能顯著促進成纖維細胞的增殖(P＜0.05),其活性與商品用重組人18ku-bFGF沒有差異(P＞0.05).錶明,所穫得的可溶性重組牛18ku-bFGF蛋白具有較高的生物學活性,可用于後續研究工作.
채용소식PCR방법극륭료우18ku-bFGF기인완정적편마서렬,병구건료원핵표체재체pET-28a-bFGF,장기전화대장간균BL21,재25℃저온조건하,용0.5 mmol/L IPTG유도표체5 h,용Ni-NTA친화순화세포렬해상청액,경Western-blotting검측,결과현시,재특정적유도조건하,중조우bFGF기인재대장간균중획득료표체,병차주요이가용성상태존재우세포중.경검측,순화후적중조단백능현저촉진성섬유세포적증식(P＜0.05),기활성여상품용중조인18ku-bFGF몰유차이(P＞0.05).표명,소획득적가용성중조우18ku-bFGF단백구유교고적생물학활성,가용우후속연구공작.
