中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2008年
6期
703-710,后插5-后插6
,共9页
何春梅%郑法雷%连耀国%刘燕萍
何春梅%鄭法雷%連耀國%劉燕萍
하춘매%정법뢰%련요국%류연평
血管内皮生长因子%上皮-间充质细胞转化%骨形成蛋白7%分化抑制冈子
血管內皮生長因子%上皮-間充質細胞轉化%骨形成蛋白7%分化抑製岡子
혈관내피생장인자%상피-간충질세포전화%골형성단백7%분화억제강자
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)对肾小管上皮一问充质细胞转化(EMT)的作用及其与骨形成蛋白-7(BMP-7)、分化抑制因子(Id)2、Id3表达的关系.方法 体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)经转化生长因子-β1(TGF-β1,5 ng/ml)与不同浓度VEGF165(0.1、1、10、100 ng/ml)共同作用,或TGF-β1(5 ng/m1)与血管内皮生长因子受体-1(VEGFRl)抗体(10μg/ml)共同作用48 h后,免疫组织化学双染方法 检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素表达,实时荧光定量PCR法、Western blot法检测细胞α-SMA、BMP-7、Id2和Id3的表达.TGF-β1(5ng/ml)、VEGF165(100 ng/ml)与激活素受体样激酶-6/Fc嵌合体(Alk6/Fc Chimera)(2 μg/ml,中和内源性BMP-7)共同作用48 h后,Western blot法检测细胞α-SMA、Id2的表达情况.结果 TGF-β1作用后,β-SMA表达比正常对照显著增强(P＜0.05),E-钙黏素、BMP-7、Id2及Id3的mRNA及蛋白质表达均显著减弱(P＜0.05).VEGF165以浓度依赖方式增强BMP-7及Id2蛋白表达,而显著降低TGF-β1上调α-SMA表达的作用(P＜0.05).加入VEGFR1抗体(10μg/ml)后,TGF-β1上调α-SMA表达的作用显著增强(P＜0.05),而E-钙黏素、BMP-7、Id2表达显著减弱(P＜0.05).TGF-β1+VEGF165+Alk6/Fc Chimera共同作用后α-SMA蛋白表达比TGF-β1+VEGF165共同作用后显著增强(P＜0.05),而Id2表达差异无显著性.结论 VEGF165可抑制TGF-β1诱导HK-2细胞发生EMT;其机制可能与BMP-7和Id2表达上调有关,而与Id3表达变化无关.Id2表达增强可能与VEGF165的直接作用有关,而与BMP-7无关.
目的 探討血管內皮生長因子(VEGF)對腎小管上皮一問充質細胞轉化(EMT)的作用及其與骨形成蛋白-7(BMP-7)、分化抑製因子(Id)2、Id3錶達的關繫.方法 體外培養的人腎小管上皮細胞(HK-2)經轉化生長因子-β1(TGF-β1,5 ng/ml)與不同濃度VEGF165(0.1、1、10、100 ng/ml)共同作用,或TGF-β1(5 ng/m1)與血管內皮生長因子受體-1(VEGFRl)抗體(10μg/ml)共同作用48 h後,免疫組織化學雙染方法 檢測細胞α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、E-鈣黏素錶達,實時熒光定量PCR法、Western blot法檢測細胞α-SMA、BMP-7、Id2和Id3的錶達.TGF-β1(5ng/ml)、VEGF165(100 ng/ml)與激活素受體樣激酶-6/Fc嵌閤體(Alk6/Fc Chimera)(2 μg/ml,中和內源性BMP-7)共同作用48 h後,Western blot法檢測細胞α-SMA、Id2的錶達情況.結果 TGF-β1作用後,β-SMA錶達比正常對照顯著增彊(P＜0.05),E-鈣黏素、BMP-7、Id2及Id3的mRNA及蛋白質錶達均顯著減弱(P＜0.05).VEGF165以濃度依賴方式增彊BMP-7及Id2蛋白錶達,而顯著降低TGF-β1上調α-SMA錶達的作用(P＜0.05).加入VEGFR1抗體(10μg/ml)後,TGF-β1上調α-SMA錶達的作用顯著增彊(P＜0.05),而E-鈣黏素、BMP-7、Id2錶達顯著減弱(P＜0.05).TGF-β1+VEGF165+Alk6/Fc Chimera共同作用後α-SMA蛋白錶達比TGF-β1+VEGF165共同作用後顯著增彊(P＜0.05),而Id2錶達差異無顯著性.結論 VEGF165可抑製TGF-β1誘導HK-2細胞髮生EMT;其機製可能與BMP-7和Id2錶達上調有關,而與Id3錶達變化無關.Id2錶達增彊可能與VEGF165的直接作用有關,而與BMP-7無關.
목적 탐토혈관내피생장인자(VEGF)대신소관상피일문충질세포전화(EMT)적작용급기여골형성단백-7(BMP-7)、분화억제인자(Id)2、Id3표체적관계.방법 체외배양적인신소관상피세포(HK-2)경전화생장인자-β1(TGF-β1,5 ng/ml)여불동농도VEGF165(0.1、1、10、100 ng/ml)공동작용,혹TGF-β1(5 ng/m1)여혈관내피생장인자수체-1(VEGFRl)항체(10μg/ml)공동작용48 h후,면역조직화학쌍염방법 검측세포α-평활기기동단백(α-SMA)、E-개점소표체,실시형광정량PCR법、Western blot법검측세포α-SMA、BMP-7、Id2화Id3적표체.TGF-β1(5ng/ml)、VEGF165(100 ng/ml)여격활소수체양격매-6/Fc감합체(Alk6/Fc Chimera)(2 μg/ml,중화내원성BMP-7)공동작용48 h후,Western blot법검측세포α-SMA、Id2적표체정황.결과 TGF-β1작용후,β-SMA표체비정상대조현저증강(P＜0.05),E-개점소、BMP-7、Id2급Id3적mRNA급단백질표체균현저감약(P＜0.05).VEGF165이농도의뢰방식증강BMP-7급Id2단백표체,이현저강저TGF-β1상조α-SMA표체적작용(P＜0.05).가입VEGFR1항체(10μg/ml)후,TGF-β1상조α-SMA표체적작용현저증강(P＜0.05),이E-개점소、BMP-7、Id2표체현저감약(P＜0.05).TGF-β1+VEGF165+Alk6/Fc Chimera공동작용후α-SMA단백표체비TGF-β1+VEGF165공동작용후현저증강(P＜0.05),이Id2표체차이무현저성.결론 VEGF165가억제TGF-β1유도HK-2세포발생EMT;기궤제가능여BMP-7화Id2표체상조유관,이여Id3표체변화무관.Id2표체증강가능여VEGF165적직접작용유관,이여BMP-7무관.
