CAJ | 학술논문

目的:制备人源抗肺腺癌单链抗体(Single-chain variable fragment,scFv)基因文库.方法:利用肺腺癌患者癌旁淋巴组织提取总RNA,通过RT-PCR分别扩增VH和VL基因片断,再将经纯化的VH和VL基因片断通过"剪切重叠延伸PCR"(Splicingover-lapping extend PCR,SOE-PCR)而形成scFv基因片断.将scFv基因克隆入噬菌粒栽体pCANTAB-5E电转入Ecoli TG1.PCR法鉴定抗体基因插入率,1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆酶切产物.结果:肺腺癌周围淋巴结的提取总RNA琼脂糖电泳结果中可见清晰的28 S、18 S条带;VH基因的大小约为370 bp,VL基因为350 bp,组装后的scFv基因约为750 bp.PCR连接产物的转化效率为2.2×107 CFU/μg,scFv的阳性插入率为83.3%(20/24).结论:成功地构建了人源抗肺腺癌scFv基因片断,为进一步筛选人源抗肺腺癌scFv库提供了试验基础.入噬菌粒栽体pCANTAB-5E电转AEcoh TG1.PCR法鉴定抗体基因插入率,1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆酶切产物.果:肺腺癌周围淋巴结的提取总RNA琼脂糖电泳结果中可见清晰的28 S、18 S条带;VH基因的大小约为370 bp,VL基因为350 bp,组装后的scFv基因约为750 bp.PCR连接产物的转化效率为2.2×107 CFU/μg,scFv的阳性插入率为83.3%(20/24).结论:成功地构建了人源
목적:제비인원항폐선암단련항체(Single-chain variable fragment,scFv)기인문고.방법:이용폐선암환자암방림파조직제취총RNA,통과RT-PCR분별확증VH화VL기인편단,재장경순화적VH화VL기인편단통과"전절중첩연신PCR"(Splicingover-lapping extend PCR,SOE-PCR)이형성scFv기인편단.장scFv기인극륭입서균립재체pCANTAB-5E전전입Ecoli TG1.PCR법감정항체기인삽입솔,1.5%경지당응효전영감정양성극륭매절산물.결과:폐선암주위림파결적제취총RNA경지당전영결과중가견청석적28 S、18 S조대;VH기인적대소약위370 bp,VL기인위350 bp,조장후적scFv기인약위750 bp.PCR련접산물적전화효솔위2.2×107 CFU/μg,scFv적양성삽입솔위83.3%(20/24).결론:성공지구건료인원항폐선암scFv기인편단,위진일보사선인원항폐선암scFv고제공료시험기출.입서균립재체pCANTAB-5E전전AEcoh TG1.PCR법감정항체기인삽입솔,1.5%경지당응효전영감정양성극륭매절산물.과:폐선암주위림파결적제취총RNA경지당전영결과중가견청석적28 S、18 S조대;VH기인적대소약위370 bp,VL기인위350 bp,조장후적scFv기인약위750 bp.PCR련접산물적전화효솔위2.2×107 CFU/μg,scFv적양성삽입솔위83.3%(20/24).결론:성공지구건료인원