抗HBsAg人源抗体Fab片段原核表达的优化
항HBsAg인원항체Fab편단원핵표체적우화
  • 万方数据
    细胞与分子免疫学杂志 세포여분자면역학잡지

    2008年 2期 147-149 ,共3页

    焦永军%曾晓燕%史智扬%汪华%崔仑标%龚希萍%薛蓉%周镇先

    초영군%증효연%사지양%왕화%최륜표%공희평%설용%주진선

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    항HBsAg인원항체%hFabHB1%원핵표체%우화
    目的:优化抗HBsAg人源抗体片段hFabHB1在大肠杆菌中功能性表达的条件.方法:通过测定宿主菌培养物A600值观察10 g/L的葡萄糖对宿主菌生长的影响;比较诱导前是否更换培养液的2种不同条件hFabHB1的表达产量;比较在37℃和25℃ 2种诱导温度下功能性hFabHB1分子的表达量以及Fd和轻链表达的平衡性.大量表达的功能性hFabHB1分子经亲和层析纯化后,用ELISA鉴定其生物活性.结果:在培养液中加入10 g/L的葡萄糖可有效抑制重组蛋白的本底表达,增加宿主菌的生长速度;在加入IPTG诱导前更换培养液可明显提高hFabHB1的表达产量;25℃的诱导温度比37℃能表达更多的功能性Fab分子,并且Fd和轻链表达量也更趋于平衡.经亲和层析纯化的hFabHB1分子可与HBsAg特异性结合.结论:实验结果为在原核系统中大量表达该抗体片段提供了技术储备.
    목적:우화항HBsAg인원항체편단hFabHB1재대장간균중공능성표체적조건.방법:통과측정숙주균배양물A600치관찰10 g/L적포도당대숙주균생장적영향;비교유도전시부경환배양액적2충불동조건hFabHB1적표체산량;비교재37℃화25℃ 2충유도온도하공능성hFabHB1분자적표체량이급Fd화경련표체적평형성.대량표체적공능성hFabHB1분자경친화층석순화후,용ELISA감정기생물활성.결과:재배양액중가입10 g/L적포도당가유효억제중조단백적본저표체,증가숙주균적생장속도;재가입IPTG유도전경환배양액가명현제고hFabHB1적표체산량;25℃적유도온도비37℃능표체경다적공능성Fab분자,병차Fd화경련표체량야경추우평형.경친화층석순화적hFabHB1분자가여HBsAg특이성결합.결론:실험결과위재원핵계통중대량표체해항체편단제공료기술저비.
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