南京医科大学学报（自然科学版）
南京醫科大學學報（自然科學版）
남경의과대학학보（자연과학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINALIS NANJING
2008年
1期
47-50
,共4页
苏建华%李慧敏%缪珩%鲁一兵%蒋秀芹
囌建華%李慧敏%繆珩%魯一兵%蔣秀芹
소건화%리혜민%무형%로일병%장수근
血红素加氧酶-1%真核表达质粒%基因重组
血紅素加氧酶-1%真覈錶達質粒%基因重組
혈홍소가양매-1%진핵표체질립%기인중조
目的:构建含人血红素加氧酶-1(HO-1)基因的重组pcDNA3.1质粒并进行鉴定.方法:利用分子生物学技术,从人肝脏标本中提取出RNA,进行RT-PCR后,做TA克隆,成功获得pMD/19-HO-1质粒,采用限制性内切酶BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ从pMD/19-HO-1质粒中将目的基因片段切出,克隆到质粒pcDNA3.1的相应酶切位点中,构建重组质粒pcDNA3.1-HO-1,采用限制性酶切、DNA测序鉴定,将构建好的质粒瞬时转染ECV304细胞株,Western blot测定HO-1表达.结果:酶切、测序鉴定证实插入位点及方向与预期完全一致,测序证实hHO-1与Gene Bank提供的原始序列完全一致,瞬时转染细胞后HO-1蛋白表达明显增高.结论:成功构建了含人血红素加氧酶-1基因的真核表达质粒,为进一步研究该基因在糖尿病血管并发症中的作用奠定基础.
目的:構建含人血紅素加氧酶-1(HO-1)基因的重組pcDNA3.1質粒併進行鑒定.方法:利用分子生物學技術,從人肝髒標本中提取齣RNA,進行RT-PCR後,做TA剋隆,成功穫得pMD/19-HO-1質粒,採用限製性內切酶BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ從pMD/19-HO-1質粒中將目的基因片段切齣,剋隆到質粒pcDNA3.1的相應酶切位點中,構建重組質粒pcDNA3.1-HO-1,採用限製性酶切、DNA測序鑒定,將構建好的質粒瞬時轉染ECV304細胞株,Western blot測定HO-1錶達.結果:酶切、測序鑒定證實插入位點及方嚮與預期完全一緻,測序證實hHO-1與Gene Bank提供的原始序列完全一緻,瞬時轉染細胞後HO-1蛋白錶達明顯增高.結論:成功構建瞭含人血紅素加氧酶-1基因的真覈錶達質粒,為進一步研究該基因在糖尿病血管併髮癥中的作用奠定基礎.
목적:구건함인혈홍소가양매-1(HO-1)기인적중조pcDNA3.1질립병진행감정.방법:이용분자생물학기술,종인간장표본중제취출RNA,진행RT-PCR후,주TA극륭,성공획득pMD/19-HO-1질립,채용한제성내절매BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ종pMD/19-HO-1질립중장목적기인편단절출,극륭도질립pcDNA3.1적상응매절위점중,구건중조질립pcDNA3.1-HO-1,채용한제성매절、DNA측서감정,장구건호적질립순시전염ECV304세포주,Western blot측정HO-1표체.결과:매절、측서감정증실삽입위점급방향여예기완전일치,측서증실hHO-1여Gene Bank제공적원시서렬완전일치,순시전염세포후HO-1단백표체명현증고.결론:성공구건료함인혈홍소가양매-1기인적진핵표체질립,위진일보연구해기인재당뇨병혈관병발증중적작용전정기출.
