免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2007年
5期
482-485
,共4页
孙岚%祁志荣%张琴%林媛%李明远%张林%蒋忠华%李虹
孫嵐%祁誌榮%張琴%林媛%李明遠%張林%蔣忠華%李虹
손람%기지영%장금%림원%리명원%장림%장충화%리홍
rIP-10%PE38KDEL%重组免疫毒素%NIH 3T3细胞%真核表达
rIP-10%PE38KDEL%重組免疫毒素%NIH 3T3細胞%真覈錶達
rIP-10%PE38KDEL%중조면역독소%NIH 3T3세포%진핵표체
目的 构建大鼠干扰素诱导蛋白10(rIP-10)基因和铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)基因的真核融合表达载体,并研究其在NIH 3T3细胞中的表达情况.方法通过PCR获得本实验需要的rIP-10基因片段,通过酶切原核表达载体PTKL459K-IL-4-PT38KDEL获得铜绿假单胞菌外毒素衍生物PE38KDEL基因,再通过适当的酶切及连接反应,构建rIP-10与PE38KDEL融合基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rIP-10-PE38KDEL.重组质粒经限制性性内切酶,PCR及DNA序列测定证实构建成功后,用PolyFect脂质体转染NIH 3T3细胞,然后用免疫荧光技术检测rIP-10-PE38KDEL融合蛋白在NIH 3T3细胞的表达.结果酶切分析、PCR及DNA序列测定证实,rIP-10-PE38KDEL融合基因被成功克隆人真核表达质粒载体pcDNA3.1(+),免疫荧光技术检测证实重组基因可在NIH 3T3细胞表达.结论 rIP-10-PE38KDEL融合基因可在NIH 3T3细胞中表达,为进一步研究其对自身免疫病的Th1细胞靶向毒性及临床应用奠定基础.
目的 構建大鼠榦擾素誘導蛋白10(rIP-10)基因和銅綠假單胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)基因的真覈融閤錶達載體,併研究其在NIH 3T3細胞中的錶達情況.方法通過PCR穫得本實驗需要的rIP-10基因片段,通過酶切原覈錶達載體PTKL459K-IL-4-PT38KDEL穫得銅綠假單胞菌外毒素衍生物PE38KDEL基因,再通過適噹的酶切及連接反應,構建rIP-10與PE38KDEL融閤基因的真覈錶達載體pcDNA3.1(+)-rIP-10-PE38KDEL.重組質粒經限製性性內切酶,PCR及DNA序列測定證實構建成功後,用PolyFect脂質體轉染NIH 3T3細胞,然後用免疫熒光技術檢測rIP-10-PE38KDEL融閤蛋白在NIH 3T3細胞的錶達.結果酶切分析、PCR及DNA序列測定證實,rIP-10-PE38KDEL融閤基因被成功剋隆人真覈錶達質粒載體pcDNA3.1(+),免疫熒光技術檢測證實重組基因可在NIH 3T3細胞錶達.結論 rIP-10-PE38KDEL融閤基因可在NIH 3T3細胞中錶達,為進一步研究其對自身免疫病的Th1細胞靶嚮毒性及臨床應用奠定基礎.
목적 구건대서간우소유도단백10(rIP-10)기인화동록가단포균외독소연생물(PE38KDEL)기인적진핵융합표체재체,병연구기재NIH 3T3세포중적표체정황.방법통과PCR획득본실험수요적rIP-10기인편단,통과매절원핵표체재체PTKL459K-IL-4-PT38KDEL획득동록가단포균외독소연생물PE38KDEL기인,재통과괄당적매절급련접반응,구건rIP-10여PE38KDEL융합기인적진핵표체재체pcDNA3.1(+)-rIP-10-PE38KDEL.중조질립경한제성성내절매,PCR급DNA서렬측정증실구건성공후,용PolyFect지질체전염NIH 3T3세포,연후용면역형광기술검측rIP-10-PE38KDEL융합단백재NIH 3T3세포적표체.결과매절분석、PCR급DNA서렬측정증실,rIP-10-PE38KDEL융합기인피성공극륭인진핵표체질립재체pcDNA3.1(+),면역형광기술검측증실중조기인가재NIH 3T3세포표체.결론 rIP-10-PE38KDEL융합기인가재NIH 3T3세포중표체,위진일보연구기대자신면역병적Th1세포파향독성급림상응용전정기출.
