中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2007年
9期
839-841,846
,共4页
许静%吴立华%徐洁%刘俊霞%孟磊%何一心%宋增璇
許靜%吳立華%徐潔%劉俊霞%孟磊%何一心%宋增璇
허정%오립화%서길%류준하%맹뢰%하일심%송증선
噬菌体展示%引导选择%表面分子%单链抗体
噬菌體展示%引導選擇%錶麵分子%單鏈抗體
서균체전시%인도선택%표면분자%단련항체
目的:从抗KG1a细胞的噬菌体展示文库中分离和鉴定抗造血干/祖细胞表面分子单链抗体(scFv),克隆其基因并研究其对应抗原在不同细胞表面的分布.方法:用完整的KG1a细胞吸附法富集文库3轮,再用CD44单克隆抗体为引导分子进行引导选择,分离单克隆后用间接免疫荧光法鉴别其细胞结合特异性.对具有不同细胞结合特异性的克隆进行DNA序列分析,用一级结构不同的单链抗体作免疫印迹鉴别抗原分子量.结果:间接免疫荧光结果显示,64个阳性克隆分别识别不同的细胞系,分属3种细胞结合谱,DNA序列测定结果证明C95、H1两个克隆具有独特的一级结构,利用Western blot成功测定它们特异性识别KG1a细胞膜蛋白的表观分子量分别为34 kD/22 kD.结论:成功建立了分离和鉴定抗细胞表面分子phage-scFv单克隆的方法,并从抗KG1a细胞的噬菌体展示文库中分离出2个抗造血干/祖细胞的特异性克隆.
目的:從抗KG1a細胞的噬菌體展示文庫中分離和鑒定抗造血榦/祖細胞錶麵分子單鏈抗體(scFv),剋隆其基因併研究其對應抗原在不同細胞錶麵的分佈.方法:用完整的KG1a細胞吸附法富集文庫3輪,再用CD44單剋隆抗體為引導分子進行引導選擇,分離單剋隆後用間接免疫熒光法鑒彆其細胞結閤特異性.對具有不同細胞結閤特異性的剋隆進行DNA序列分析,用一級結構不同的單鏈抗體作免疫印跡鑒彆抗原分子量.結果:間接免疫熒光結果顯示,64箇暘性剋隆分彆識彆不同的細胞繫,分屬3種細胞結閤譜,DNA序列測定結果證明C95、H1兩箇剋隆具有獨特的一級結構,利用Western blot成功測定它們特異性識彆KG1a細胞膜蛋白的錶觀分子量分彆為34 kD/22 kD.結論:成功建立瞭分離和鑒定抗細胞錶麵分子phage-scFv單剋隆的方法,併從抗KG1a細胞的噬菌體展示文庫中分離齣2箇抗造血榦/祖細胞的特異性剋隆.
목적:종항KG1a세포적서균체전시문고중분리화감정항조혈간/조세포표면분자단련항체(scFv),극륭기기인병연구기대응항원재불동세포표면적분포.방법:용완정적KG1a세포흡부법부집문고3륜,재용CD44단극륭항체위인도분자진행인도선택,분리단극륭후용간접면역형광법감별기세포결합특이성.대구유불동세포결합특이성적극륭진행DNA서렬분석,용일급결구불동적단련항체작면역인적감별항원분자량.결과:간접면역형광결과현시,64개양성극륭분별식별불동적세포계,분속3충세포결합보,DNA서렬측정결과증명C95、H1량개극륭구유독특적일급결구,이용Western blot성공측정타문특이성식별KG1a세포막단백적표관분자량분별위34 kD/22 kD.결론:성공건립료분리화감정항세포표면분자phage-scFv단극륭적방법,병종항KG1a세포적서균체전시문고중분리출2개항조혈간/조세포적특이성극륭.
