微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2007年
4期
686-691
,共6页
刘国平%吴斌%林艺远%金梅林%陈焕春%赵战勤%汤细彪%杨明柳
劉國平%吳斌%林藝遠%金梅林%陳煥春%趙戰勤%湯細彪%楊明柳
류국평%오빈%림예원%금매림%진환춘%조전근%탕세표%양명류
大肠杆菌%SLT-ⅡeB基因%融合表达%生物学活性%免疫原性
大腸桿菌%SLT-ⅡeB基因%融閤錶達%生物學活性%免疫原性
대장간균%SLT-ⅡeB기인%융합표체%생물학활성%면역원성
根据大肠杆菌Ee株主要免疫原性片段SLT-ⅡeB的基因序列,设计合成两对引物,利用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)表达系统将三拷贝SLT-ⅡeB的融合基因串联于GST下游,并在大肠杆菌中成功表达,获得了大小约为45kDa融合蛋白GST-3B,表达产物以包涵体形式产生,Western blot检测证实表达的融合蛋白具有良好的生物学活性;结合抑制试验表明,与单拷贝融合表达蛋白GST-B相比,GST-3B与水肿毒素受体的亲和力更强.GST-3B及GST-B与等量弗氏不完全佐剂乳化后制成亚单位疫苗,间隔两周两次皮下免疫小鼠.结果GST-3B疫苗组产生的抗体水平明显高于GST-B疫苗组,但两种疫苗组的抗体消长趋势相同.二免后两周用5×LD50的Ee株大肠杆菌进行腹腔攻毒.GST-3B疫苗组保护率为60.0%(6/10),明显优于GST-B疫苗组40.0%(4/10).研究结果表明GST-3B具有良好的生物学活性和免疫原性,可以作为疫苗添加成分,显示了良好的应用前景.
根據大腸桿菌Ee株主要免疫原性片段SLT-ⅡeB的基因序列,設計閤成兩對引物,利用穀胱甘肽-S-轉移酶(GST)錶達繫統將三拷貝SLT-ⅡeB的融閤基因串聯于GST下遊,併在大腸桿菌中成功錶達,穫得瞭大小約為45kDa融閤蛋白GST-3B,錶達產物以包涵體形式產生,Western blot檢測證實錶達的融閤蛋白具有良好的生物學活性;結閤抑製試驗錶明,與單拷貝融閤錶達蛋白GST-B相比,GST-3B與水腫毒素受體的親和力更彊.GST-3B及GST-B與等量弗氏不完全佐劑乳化後製成亞單位疫苗,間隔兩週兩次皮下免疫小鼠.結果GST-3B疫苗組產生的抗體水平明顯高于GST-B疫苗組,但兩種疫苗組的抗體消長趨勢相同.二免後兩週用5×LD50的Ee株大腸桿菌進行腹腔攻毒.GST-3B疫苗組保護率為60.0%(6/10),明顯優于GST-B疫苗組40.0%(4/10).研究結果錶明GST-3B具有良好的生物學活性和免疫原性,可以作為疫苗添加成分,顯示瞭良好的應用前景.
근거대장간균Ee주주요면역원성편단SLT-ⅡeB적기인서렬,설계합성량대인물,이용곡광감태-S-전이매(GST)표체계통장삼고패SLT-ⅡeB적융합기인천련우GST하유,병재대장간균중성공표체,획득료대소약위45kDa융합단백GST-3B,표체산물이포함체형식산생,Western blot검측증실표체적융합단백구유량호적생물학활성;결합억제시험표명,여단고패융합표체단백GST-B상비,GST-3B여수종독소수체적친화력경강.GST-3B급GST-B여등량불씨불완전좌제유화후제성아단위역묘,간격량주량차피하면역소서.결과GST-3B역묘조산생적항체수평명현고우GST-B역묘조,단량충역묘조적항체소장추세상동.이면후량주용5×LD50적Ee주대장간균진행복강공독.GST-3B역묘조보호솔위60.0%(6/10),명현우우GST-B역묘조40.0%(4/10).연구결과표명GST-3B구유량호적생물학활성화면역원성,가이작위역묘첨가성분,현시료량호적응용전경.
