华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2008年
5期
561-564,封2
,共5页
黄丽霞%尹丙姣%王晶%梁慧芳%曾庆岭%姜小丹%李卓娅
黃麗霞%尹丙姣%王晶%樑慧芳%曾慶嶺%薑小丹%李卓婭
황려하%윤병교%왕정%량혜방%증경령%강소단%리탁아
肿瘤坏死因子-α%真核表达%IgGFc融合蛋白%封闭肽
腫瘤壞死因子-α%真覈錶達%IgGFc融閤蛋白%封閉肽
종류배사인자-α%진핵표체%IgGFc융합단백%봉폐태
目的 构建肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)封闭肽与IgGFc融合蛋白的真核表达载体,检测其表达和生物学活性.方法 将合成的TNFR1封闭肽(TNFR1BP)基因片段插入质粒pIG/3C,构建真核表达载体pIG/3C-TNFR1BP;脂质体法将重组载体转染COS-7细胞;ELISA和Western blot法检测转染细胞的培养上清中TNFR1BP/IgGFc融合蛋白的表达;间接免疫荧光抑制实验、细胞毒抑制实验检测融合蛋白对TNFR1的封闭作用.结果 经PCR和核苷酸序列测定证实TNFR1BP基因正确插入质粒pIG/3C.ELISA检测证实,在转染细胞培养上清中有融合蛋白的表达;间接免疫荧光抑制实验和细胞毒抑制实验证实融合蛋白能结合L929细胞表面的TNFR1,并能抑制分泌型肿瘤坏死因子α(sTNF-α)介导的细胞毒作用.结论 成功构建并实现TNFR1BP/IgGFc融合蛋白真核表达;体外实验证实此融合蛋白可通过与细胞表面TNFR1结合,从而拮抗sTNF-α介导的生物学效应.
目的 構建腫瘤壞死因子受體1(TNFR1)封閉肽與IgGFc融閤蛋白的真覈錶達載體,檢測其錶達和生物學活性.方法 將閤成的TNFR1封閉肽(TNFR1BP)基因片段插入質粒pIG/3C,構建真覈錶達載體pIG/3C-TNFR1BP;脂質體法將重組載體轉染COS-7細胞;ELISA和Western blot法檢測轉染細胞的培養上清中TNFR1BP/IgGFc融閤蛋白的錶達;間接免疫熒光抑製實驗、細胞毒抑製實驗檢測融閤蛋白對TNFR1的封閉作用.結果 經PCR和覈苷痠序列測定證實TNFR1BP基因正確插入質粒pIG/3C.ELISA檢測證實,在轉染細胞培養上清中有融閤蛋白的錶達;間接免疫熒光抑製實驗和細胞毒抑製實驗證實融閤蛋白能結閤L929細胞錶麵的TNFR1,併能抑製分泌型腫瘤壞死因子α(sTNF-α)介導的細胞毒作用.結論 成功構建併實現TNFR1BP/IgGFc融閤蛋白真覈錶達;體外實驗證實此融閤蛋白可通過與細胞錶麵TNFR1結閤,從而拮抗sTNF-α介導的生物學效應.
목적 구건종류배사인자수체1(TNFR1)봉폐태여IgGFc융합단백적진핵표체재체,검측기표체화생물학활성.방법 장합성적TNFR1봉폐태(TNFR1BP)기인편단삽입질립pIG/3C,구건진핵표체재체pIG/3C-TNFR1BP;지질체법장중조재체전염COS-7세포;ELISA화Western blot법검측전염세포적배양상청중TNFR1BP/IgGFc융합단백적표체;간접면역형광억제실험、세포독억제실험검측융합단백대TNFR1적봉폐작용.결과 경PCR화핵감산서렬측정증실TNFR1BP기인정학삽입질립pIG/3C.ELISA검측증실,재전염세포배양상청중유융합단백적표체;간접면역형광억제실험화세포독억제실험증실융합단백능결합L929세포표면적TNFR1,병능억제분비형종류배사인자α(sTNF-α)개도적세포독작용.결론 성공구건병실현TNFR1BP/IgGFc융합단백진핵표체;체외실험증실차융합단백가통과여세포표면TNFR1결합,종이길항sTNF-α개도적생물학효응.
