中国血液流变学杂志
中國血液流變學雜誌
중국혈액류변학잡지
CHINESE JOURNAL OF HEMORHEOLOGY
2007年
2期
181-184
,共4页
胡水清%危华峰%张大鹏%史菊鲜%樊克兴%王皓%戴建新%郭亚军%张雁云
鬍水清%危華峰%張大鵬%史菊鮮%樊剋興%王皓%戴建新%郭亞軍%張雁雲
호수청%위화봉%장대붕%사국선%번극흥%왕호%대건신%곽아군%장안운
小鼠Foxp3基因%原核表达%蛋白纯化
小鼠Foxp3基因%原覈錶達%蛋白純化
소서Foxp3기인%원핵표체%단백순화
目的 克隆小鼠Foxp3(MFoxp3)基因,构建含该基因的原核表达载体,并表达、纯化出小鼠的Foxp3融合蛋白.方法 RT-PCR方法从小鼠淋巴细胞扩增出小鼠Foxp3基因,连入TEasyVector进行测序,然后将序列正确的小鼠Foxp3基因用酶切的方法从Teasyvector切下,并将其连接到用相同酶切,含有硫氧还蛋白(含6个组氨酸"标签")的pET32a(+)原核表达载体中构建pET 32a(+)-MFoxp3表达载体.用IPTG诱导转化pET 32a(+)-MFoxp3表达载体的大肠杆菌BL21(DE3),并以镍螯合层析法纯化MFoxp3融合蛋白.结果 经RT-PCR成功地克隆了1,290 bp的小鼠Foxp3基因,测序正确后转化大肠杆菌原核表达载体pET 32a(+),重组质粒在BL21(DE3)中成功表达出分子质量约为63 kD的融合蛋白,运用Ni-NTA方法纯化出目的蛋白,纯化后的蛋白纯度达80%,并用Western Blotting检测蛋白的灵敏度和特异性.结论 构建了小鼠Foxp3的融合蛋白原核表达载体并成功表达与纯化出小鼠Foxp3的融合蛋白.
目的 剋隆小鼠Foxp3(MFoxp3)基因,構建含該基因的原覈錶達載體,併錶達、純化齣小鼠的Foxp3融閤蛋白.方法 RT-PCR方法從小鼠淋巴細胞擴增齣小鼠Foxp3基因,連入TEasyVector進行測序,然後將序列正確的小鼠Foxp3基因用酶切的方法從Teasyvector切下,併將其連接到用相同酶切,含有硫氧還蛋白(含6箇組氨痠"標籤")的pET32a(+)原覈錶達載體中構建pET 32a(+)-MFoxp3錶達載體.用IPTG誘導轉化pET 32a(+)-MFoxp3錶達載體的大腸桿菌BL21(DE3),併以鎳螯閤層析法純化MFoxp3融閤蛋白.結果 經RT-PCR成功地剋隆瞭1,290 bp的小鼠Foxp3基因,測序正確後轉化大腸桿菌原覈錶達載體pET 32a(+),重組質粒在BL21(DE3)中成功錶達齣分子質量約為63 kD的融閤蛋白,運用Ni-NTA方法純化齣目的蛋白,純化後的蛋白純度達80%,併用Western Blotting檢測蛋白的靈敏度和特異性.結論 構建瞭小鼠Foxp3的融閤蛋白原覈錶達載體併成功錶達與純化齣小鼠Foxp3的融閤蛋白.
목적 극륭소서Foxp3(MFoxp3)기인,구건함해기인적원핵표체재체,병표체、순화출소서적Foxp3융합단백.방법 RT-PCR방법종소서림파세포확증출소서Foxp3기인,련입TEasyVector진행측서,연후장서렬정학적소서Foxp3기인용매절적방법종Teasyvector절하,병장기련접도용상동매절,함유류양환단백(함6개조안산"표첨")적pET32a(+)원핵표체재체중구건pET 32a(+)-MFoxp3표체재체.용IPTG유도전화pET 32a(+)-MFoxp3표체재체적대장간균BL21(DE3),병이얼오합층석법순화MFoxp3융합단백.결과 경RT-PCR성공지극륭료1,290 bp적소서Foxp3기인,측서정학후전화대장간균원핵표체재체pET 32a(+),중조질립재BL21(DE3)중성공표체출분자질량약위63 kD적융합단백,운용Ni-NTA방법순화출목적단백,순화후적단백순도체80%,병용Western Blotting검측단백적령민도화특이성.결론 구건료소서Foxp3적융합단백원핵표체재체병성공표체여순화출소서Foxp3적융합단백.
