贵州医药
貴州醫藥
귀주의약
GUIZHOU MEDICAL JOURNAL
2006年
7期
584-587
,共4页
王萍玲%胡丽娜%孙袁%梁雪雯
王萍玲%鬍麗娜%孫袁%樑雪雯
왕평령%호려나%손원%량설문
RNA干扰%基因%H-ras%表达%卵巢肿瘤%细胞株%SKOV3
RNA榦擾%基因%H-ras%錶達%卵巢腫瘤%細胞株%SKOV3
RNA간우%기인%H-ras%표체%란소종류%세포주%SKOV3
目的 运用构建的小发夹状RNA重组质粒pshRNA/H-ras,研究其对卵巢癌SK-OV3细胞株内源H-ras基因的抑制作用.方法 应用基因克隆技术,设计含21bp H-ras基因编码序列片段及中间以4～5个bp间隔的反向重复序列,克隆至转录载体pTZU6+1上并行序列分析.转染重组质粒pshRNA/H-ras至SKOV3细胞中,分别采用RT-PCR、Western blot检测细胞内H-rasmRNA和蛋白表达的变化.结果 成功构建发夹状RNA载体,经DNA序列鉴定为正确的目的序列.RT-PCR和Western blot结果表明,重组质粒pshRNA/H-ras1和pshRNA/H-ras2均能在基因转录水平和蛋白表达水平上明显抑制SKOV3细胞内源H-ras蛋白的表达,抑制率达67%以上.结论 重组质粒pshRNA/H-ras可显著抑制SKOV3细胞内源H-ras基因mRNA的转录和相应蛋白质的表达,为进一步研究H-ras基因在卵巢癌细胞异常增殖中的作用打下基础.
目的 運用構建的小髮夾狀RNA重組質粒pshRNA/H-ras,研究其對卵巢癌SK-OV3細胞株內源H-ras基因的抑製作用.方法 應用基因剋隆技術,設計含21bp H-ras基因編碼序列片段及中間以4～5箇bp間隔的反嚮重複序列,剋隆至轉錄載體pTZU6+1上併行序列分析.轉染重組質粒pshRNA/H-ras至SKOV3細胞中,分彆採用RT-PCR、Western blot檢測細胞內H-rasmRNA和蛋白錶達的變化.結果 成功構建髮夾狀RNA載體,經DNA序列鑒定為正確的目的序列.RT-PCR和Western blot結果錶明,重組質粒pshRNA/H-ras1和pshRNA/H-ras2均能在基因轉錄水平和蛋白錶達水平上明顯抑製SKOV3細胞內源H-ras蛋白的錶達,抑製率達67%以上.結論 重組質粒pshRNA/H-ras可顯著抑製SKOV3細胞內源H-ras基因mRNA的轉錄和相應蛋白質的錶達,為進一步研究H-ras基因在卵巢癌細胞異常增殖中的作用打下基礎.
목적 운용구건적소발협상RNA중조질립pshRNA/H-ras,연구기대란소암SK-OV3세포주내원H-ras기인적억제작용.방법 응용기인극륭기술,설계함21bp H-ras기인편마서렬편단급중간이4～5개bp간격적반향중복서렬,극륭지전록재체pTZU6+1상병행서렬분석.전염중조질립pshRNA/H-ras지SKOV3세포중,분별채용RT-PCR、Western blot검측세포내H-rasmRNA화단백표체적변화.결과 성공구건발협상RNA재체,경DNA서렬감정위정학적목적서렬.RT-PCR화Western blot결과표명,중조질립pshRNA/H-ras1화pshRNA/H-ras2균능재기인전록수평화단백표체수평상명현억제SKOV3세포내원H-ras단백적표체,억제솔체67%이상.결론 중조질립pshRNA/H-ras가현저억제SKOV3세포내원H-ras기인mRNA적전록화상응단백질적표체,위진일보연구H-ras기인재란소암세포이상증식중적작용타하기출.
