兽类学报
獸類學報
수류학보
ACTA THERIOLOGICA SINICA
2009年
2期
198-203
,共6页
李红阁%赵新全%常智杰%任芳丽
李紅閣%趙新全%常智傑%任芳麗
리홍각%조신전%상지걸%임방려
高原鼠兔%低氧诱导因子-1α%原核表达%多克隆抗体%免疫印迹%免疫染色
高原鼠兔%低氧誘導因子-1α%原覈錶達%多剋隆抗體%免疫印跡%免疫染色
고원서토%저양유도인자-1α%원핵표체%다극륭항체%면역인적%면역염색
高原鼠兔生活在青藏高原海拔3 000～5 000 m的区域,具有极强的低温、低氧耐受能力.低氧诱导因子-1(HIF-1)是一种由HIF-1α和HIF-1β组成的异源二聚体转录因子,在生物体的低氧适应性调节中起着关键作用.低氧主要通过调节HIF-1α蛋白水平来影响HIF-1α的转录活性.本研究用DNA重组技术将高原鼠兔HIF-1α(pHIF-1α)(538/822)编码基因序列亚克隆至原核表达载体PGEX- 4T-1中,并在大肠杆菌BL21菌株中进行高效诱导表达,获得可溶性表达产物.将纯化后的GST-pHIF-1α(538/822)融合蛋白作为免疫原免疫家兔制备多克隆抗体.免疫印迹结果表明,制备的抗体能够识别高原鼠兔HIF-1α蛋白.进一步利用亲和纯化的方法对此多克隆抗体进行了纯化.免疫印迹和免疫染色的结果表明,纯化的抗体可以用于检测外源以及内源的高原鼠兔HIF-1α蛋白的表达和定位,为后续的研究提供了重要的实验材料.
高原鼠兔生活在青藏高原海拔3 000～5 000 m的區域,具有極彊的低溫、低氧耐受能力.低氧誘導因子-1(HIF-1)是一種由HIF-1α和HIF-1β組成的異源二聚體轉錄因子,在生物體的低氧適應性調節中起著關鍵作用.低氧主要通過調節HIF-1α蛋白水平來影響HIF-1α的轉錄活性.本研究用DNA重組技術將高原鼠兔HIF-1α(pHIF-1α)(538/822)編碼基因序列亞剋隆至原覈錶達載體PGEX- 4T-1中,併在大腸桿菌BL21菌株中進行高效誘導錶達,穫得可溶性錶達產物.將純化後的GST-pHIF-1α(538/822)融閤蛋白作為免疫原免疫傢兔製備多剋隆抗體.免疫印跡結果錶明,製備的抗體能夠識彆高原鼠兔HIF-1α蛋白.進一步利用親和純化的方法對此多剋隆抗體進行瞭純化.免疫印跡和免疫染色的結果錶明,純化的抗體可以用于檢測外源以及內源的高原鼠兔HIF-1α蛋白的錶達和定位,為後續的研究提供瞭重要的實驗材料.
고원서토생활재청장고원해발3 000～5 000 m적구역,구유겁강적저온、저양내수능력.저양유도인자-1(HIF-1)시일충유HIF-1α화HIF-1β조성적이원이취체전록인자,재생물체적저양괄응성조절중기착관건작용.저양주요통과조절HIF-1α단백수평래영향HIF-1α적전록활성.본연구용DNA중조기술장고원서토HIF-1α(pHIF-1α)(538/822)편마기인서렬아극륭지원핵표체재체PGEX- 4T-1중,병재대장간균BL21균주중진행고효유도표체,획득가용성표체산물.장순화후적GST-pHIF-1α(538/822)융합단백작위면역원면역가토제비다극륭항체.면역인적결과표명,제비적항체능구식별고원서토HIF-1α단백.진일보이용친화순화적방법대차다극륭항체진행료순화.면역인적화면역염색적결과표명,순화적항체가이용우검측외원이급내원적고원서토HIF-1α단백적표체화정위,위후속적연구제공료중요적실험재료.
