重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2006年
1期
10-13
,共4页
唐霓%Yu Xiang%Helen Ke%Zhihui Yao%敬凌霞%黄爱龙%郑建
唐霓%Yu Xiang%Helen Ke%Zhihui Yao%敬凌霞%黃愛龍%鄭建
당예%Yu Xiang%Helen Ke%Zhihui Yao%경릉하%황애룡%정건
CP4-EPSPS%快速检测%亲和层析%纯化
CP4-EPSPS%快速檢測%親和層析%純化
CP4-EPSPS%쾌속검측%친화층석%순화
目的:表达并纯化重组CP4-EPSP合成酶(CP4-EPSPS),研究重组CP4-EPSPS的免疫学活性;为进一步制备单克隆抗体和开发检测CP4-EPSPS的快速诊断试剂奠定基础.方法:诱导表达含转基因大豆CP4-EPSPS的重组载体pET-EPSPS,经Ni-NTA琼脂糖树脂亲和层析纯化,以ELISA、胶体金试条、Western杂交鉴定其免疫活性.结果:重组CP4-EPSPS以包涵体表达为主,上清表达量极低,但胶体金试纸条检测发现上清中CP4-EPSPS抗原活性强;复性包涵体的抗原性与上清的抗原性明显不同.采用扩大培养量、缩小超声破碎重悬体积的方法,从上清中纯化CP4-EPSPS获得成功,ELISA检测此重组抗原免疫小鼠血清抗体滴度可达到1:625,000;Western杂交证实重组抗原免疫血清与CP4-EPSPS标准品有较好的免疫反应性.结论:包涵体的简单复性方法难以恢复其关键的抗原决定簇的免疫原性;运用胶体金试纸条检测重组CP4-EPSPS活性,灵敏度高,简单快捷,对CP4-EPSPS特异检测相关的关键性抗原决定簇的甄别有重要作用,可指导重组抗原的纯化和在免疫学研究、特别是在单克隆抗体开发中的应用.
目的:錶達併純化重組CP4-EPSP閤成酶(CP4-EPSPS),研究重組CP4-EPSPS的免疫學活性;為進一步製備單剋隆抗體和開髮檢測CP4-EPSPS的快速診斷試劑奠定基礎.方法:誘導錶達含轉基因大豆CP4-EPSPS的重組載體pET-EPSPS,經Ni-NTA瓊脂糖樹脂親和層析純化,以ELISA、膠體金試條、Western雜交鑒定其免疫活性.結果:重組CP4-EPSPS以包涵體錶達為主,上清錶達量極低,但膠體金試紙條檢測髮現上清中CP4-EPSPS抗原活性彊;複性包涵體的抗原性與上清的抗原性明顯不同.採用擴大培養量、縮小超聲破碎重懸體積的方法,從上清中純化CP4-EPSPS穫得成功,ELISA檢測此重組抗原免疫小鼠血清抗體滴度可達到1:625,000;Western雜交證實重組抗原免疫血清與CP4-EPSPS標準品有較好的免疫反應性.結論:包涵體的簡單複性方法難以恢複其關鍵的抗原決定簇的免疫原性;運用膠體金試紙條檢測重組CP4-EPSPS活性,靈敏度高,簡單快捷,對CP4-EPSPS特異檢測相關的關鍵性抗原決定簇的甄彆有重要作用,可指導重組抗原的純化和在免疫學研究、特彆是在單剋隆抗體開髮中的應用.
목적:표체병순화중조CP4-EPSP합성매(CP4-EPSPS),연구중조CP4-EPSPS적면역학활성;위진일보제비단극륭항체화개발검측CP4-EPSPS적쾌속진단시제전정기출.방법:유도표체함전기인대두CP4-EPSPS적중조재체pET-EPSPS,경Ni-NTA경지당수지친화층석순화,이ELISA、효체금시조、Western잡교감정기면역활성.결과:중조CP4-EPSPS이포함체표체위주,상청표체량겁저,단효체금시지조검측발현상청중CP4-EPSPS항원활성강;복성포함체적항원성여상청적항원성명현불동.채용확대배양량、축소초성파쇄중현체적적방법,종상청중순화CP4-EPSPS획득성공,ELISA검측차중조항원면역소서혈청항체적도가체도1:625,000;Western잡교증실중조항원면역혈청여CP4-EPSPS표준품유교호적면역반응성.결론:포함체적간단복성방법난이회복기관건적항원결정족적면역원성;운용효체금시지조검측중조CP4-EPSPS활성,령민도고,간단쾌첩,대CP4-EPSPS특이검측상관적관건성항원결정족적견별유중요작용,가지도중조항원적순화화재면역학연구、특별시재단극륭항체개발중적응용.
