病毒学报
病毒學報
병독학보
CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY
2001年
4期
318-321
,共4页
张立国%曾革非%董婕%陈爱君%姚立红%郭元吉%张智清
張立國%曾革非%董婕%陳愛君%姚立紅%郭元吉%張智清
장입국%증혁비%동첩%진애군%요립홍%곽원길%장지청
流行性感冒病毒%M2蛋白%可溶性表达%免疫原性
流行性感冒病毒%M2蛋白%可溶性錶達%免疫原性
류행성감모병독%M2단백%가용성표체%면역원성
流行性感冒(流感)病毒的M2蛋白是其保护性抗原之一,在几乎所有甲型流感病毒中高度保守,因此可以用来研究具有交叉保护能力的流感疫苗.然而M2分子在病毒颗粒中含量非常少,用从病毒中纯化的方法很难获得足够的免疫原.在原核表达时发现,M2蛋白对宿主菌具有很强的毒性作用,导致其死亡,因此很难获得高表达.在本研究中,采用RT-PCR方法从病毒感染的MDCK细胞中克隆了A1/PR/8/34毒株的M2基因,然后通过基因工程手段缺失了M2蛋白的跨膜区26～55位氨基酸的编码序列,将其克隆到pET-32a中,与硫氧还蛋白融合,在大肠杆菌中获得了高效表达,并且表达产物以可溶形式存在,不形成包涵体.利用硫酸铵盐析结合金属离子鏊和柱亲和层析的方法纯化了表达的融合蛋白.免疫荧光实验表明,融合蛋白免疫小鼠后产生的抗血清能够与流感病毒感染的细胞发生特异性的结合,证明表达产物具有流感病毒M2蛋白的抗原性.
流行性感冒(流感)病毒的M2蛋白是其保護性抗原之一,在幾乎所有甲型流感病毒中高度保守,因此可以用來研究具有交扠保護能力的流感疫苗.然而M2分子在病毒顆粒中含量非常少,用從病毒中純化的方法很難穫得足夠的免疫原.在原覈錶達時髮現,M2蛋白對宿主菌具有很彊的毒性作用,導緻其死亡,因此很難穫得高錶達.在本研究中,採用RT-PCR方法從病毒感染的MDCK細胞中剋隆瞭A1/PR/8/34毒株的M2基因,然後通過基因工程手段缺失瞭M2蛋白的跨膜區26～55位氨基痠的編碼序列,將其剋隆到pET-32a中,與硫氧還蛋白融閤,在大腸桿菌中穫得瞭高效錶達,併且錶達產物以可溶形式存在,不形成包涵體.利用硫痠銨鹽析結閤金屬離子鏊和柱親和層析的方法純化瞭錶達的融閤蛋白.免疫熒光實驗錶明,融閤蛋白免疫小鼠後產生的抗血清能夠與流感病毒感染的細胞髮生特異性的結閤,證明錶達產物具有流感病毒M2蛋白的抗原性.
류행성감모(류감)병독적M2단백시기보호성항원지일,재궤호소유갑형류감병독중고도보수,인차가이용래연구구유교차보호능력적류감역묘.연이M2분자재병독과립중함량비상소,용종병독중순화적방법흔난획득족구적면역원.재원핵표체시발현,M2단백대숙주균구유흔강적독성작용,도치기사망,인차흔난획득고표체.재본연구중,채용RT-PCR방법종병독감염적MDCK세포중극륭료A1/PR/8/34독주적M2기인,연후통과기인공정수단결실료M2단백적과막구26～55위안기산적편마서렬,장기극륭도pET-32a중,여류양환단백융합,재대장간균중획득료고효표체,병차표체산물이가용형식존재,불형성포함체.이용류산안염석결합금속리자오화주친화층석적방법순화료표체적융합단백.면역형광실험표명,융합단백면역소서후산생적항혈청능구여류감병독감염적세포발생특이성적결합,증명표체산물구유류감병독M2단백적항원성.
