中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2010年
37期
6847-6851
,共5页
力生长因子%腺病毒%转染%成骨细胞%载体构建%骨组织工程
力生長因子%腺病毒%轉染%成骨細胞%載體構建%骨組織工程
력생장인자%선병독%전염%성골세포%재체구건%골조직공정
背景:研究表明,力生长因子(mechano-growth faotor,MGF)能激活卫星细胞,促进成肌细胞增殖.在治疗肌损失、预防心肌损伤和修复神经损伤等方面有重要的作用.机械拉伸可使成骨细胞表达MGF,但是MGF对骨组织生理生化行为的影响机制尚不清楚.目的:应用携带MGF基因的重组腺病毒载体转染成骨细胞,观察MGF在成骨细胞中的表达.方法:将MGF基因插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,构建pAdTmck-MGF重组体.pAdTrack-MGF与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183菌中进行同源重组,生成重组腺病毒质粒pAdEasy-MGF.脂质体介导pAdEasy-MGF转染293A细胞,包装成整的重组腺病毒Ad/MGF.用Ad/MGF感染原代培养的大鼠成骨细胞,荧光示踪计数法测定感染效率,RT-PCR法对重组腺病毒感染结果进行鉴定.结果与结论:实验构建的重组腺病毒载体Ad/MGF滴度可达8.5×108pfu/mL.Ad/MGF能高效感染体外培养的Wistar大鼠成骨细胞并表达目的基因,当感染复数为100时,感染效率最高.说明实验构建的Ad/MGF重组腺病毒可在大鼠成骨细胞中有效表达.
揹景:研究錶明,力生長因子(mechano-growth faotor,MGF)能激活衛星細胞,促進成肌細胞增殖.在治療肌損失、預防心肌損傷和脩複神經損傷等方麵有重要的作用.機械拉伸可使成骨細胞錶達MGF,但是MGF對骨組織生理生化行為的影響機製尚不清楚.目的:應用攜帶MGF基因的重組腺病毒載體轉染成骨細胞,觀察MGF在成骨細胞中的錶達.方法:將MGF基因插入到腺病毒穿梭質粒pAdTrack-CMV中,構建pAdTmck-MGF重組體.pAdTrack-MGF與腺病毒骨架質粒pAdEasy-1在BJ5183菌中進行同源重組,生成重組腺病毒質粒pAdEasy-MGF.脂質體介導pAdEasy-MGF轉染293A細胞,包裝成整的重組腺病毒Ad/MGF.用Ad/MGF感染原代培養的大鼠成骨細胞,熒光示蹤計數法測定感染效率,RT-PCR法對重組腺病毒感染結果進行鑒定.結果與結論:實驗構建的重組腺病毒載體Ad/MGF滴度可達8.5×108pfu/mL.Ad/MGF能高效感染體外培養的Wistar大鼠成骨細胞併錶達目的基因,噹感染複數為100時,感染效率最高.說明實驗構建的Ad/MGF重組腺病毒可在大鼠成骨細胞中有效錶達.
배경:연구표명,력생장인자(mechano-growth faotor,MGF)능격활위성세포,촉진성기세포증식.재치료기손실、예방심기손상화수복신경손상등방면유중요적작용.궤계랍신가사성골세포표체MGF,단시MGF대골조직생리생화행위적영향궤제상불청초.목적:응용휴대MGF기인적중조선병독재체전염성골세포,관찰MGF재성골세포중적표체.방법:장MGF기인삽입도선병독천사질립pAdTrack-CMV중,구건pAdTmck-MGF중조체.pAdTrack-MGF여선병독골가질립pAdEasy-1재BJ5183균중진행동원중조,생성중조선병독질립pAdEasy-MGF.지질체개도pAdEasy-MGF전염293A세포,포장성정적중조선병독Ad/MGF.용Ad/MGF감염원대배양적대서성골세포,형광시종계수법측정감염효솔,RT-PCR법대중조선병독감염결과진행감정.결과여결론:실험구건적중조선병독재체Ad/MGF적도가체8.5×108pfu/mL.Ad/MGF능고효감염체외배양적Wistar대서성골세포병표체목적기인,당감염복수위100시,감염효솔최고.설명실험구건적Ad/MGF중조선병독가재대서성골세포중유효표체.
