河北农业大学学报
河北農業大學學報
하북농업대학학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL UNIVERSITY OF HEBEI
2002年
4期
62-66,72
,共6页
吴志明%朱水芳%田文会%张成良
吳誌明%硃水芳%田文會%張成良
오지명%주수방%전문회%장성량
马铃薯卷叶病毒%外壳蛋白基因%克隆
馬鈴藷捲葉病毒%外殼蛋白基因%剋隆
마령서권협병독%외각단백기인%극륭
从典型的马铃薯卷叶病毒病株中直接提取出植物总RNA,根据PLRV外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物,经RT-PCR法扩增出全长的cDNA片段,将其克隆到质粒pGEM-3Zf(+)上,并进行了序列分析.结果表明,克隆的cDNA片段由627个核苷酸组成,编码208个氨基酸组成的理论分子量为23k的蛋白,与PLRV外壳蛋白的大小一致;此外克隆片段还含有一个不同于外壳蛋白基因的阅读框架,该框架由465个核苷酸组成,编码155个氨基酸组成的理论分子量为17k的蛋白,与PLRV的17k蛋白大小一致.与国外报道的几个株系相比,PLRV分离物的外壳蛋白基因及17k蛋白基因的核苷酸同源率分别高达97.5%～99.7%和96.5%～99.6%,由此推测的氨基酸同源率高达97.6%～99.5%和96.1%～99.4%,说明所克隆的PLRV外壳蛋白基因和17k蛋白基因具有高度的保守性,本研究克隆了PLRV分离物外壳蛋白和17k蛋白基因的序列,为进一步进行抗PLRV基因工程研究奠定基础.
從典型的馬鈴藷捲葉病毒病株中直接提取齣植物總RNA,根據PLRV外殼蛋白基因序列,設計閤成瞭一對寡覈苷痠引物,經RT-PCR法擴增齣全長的cDNA片段,將其剋隆到質粒pGEM-3Zf(+)上,併進行瞭序列分析.結果錶明,剋隆的cDNA片段由627箇覈苷痠組成,編碼208箇氨基痠組成的理論分子量為23k的蛋白,與PLRV外殼蛋白的大小一緻;此外剋隆片段還含有一箇不同于外殼蛋白基因的閱讀框架,該框架由465箇覈苷痠組成,編碼155箇氨基痠組成的理論分子量為17k的蛋白,與PLRV的17k蛋白大小一緻.與國外報道的幾箇株繫相比,PLRV分離物的外殼蛋白基因及17k蛋白基因的覈苷痠同源率分彆高達97.5%～99.7%和96.5%～99.6%,由此推測的氨基痠同源率高達97.6%～99.5%和96.1%～99.4%,說明所剋隆的PLRV外殼蛋白基因和17k蛋白基因具有高度的保守性,本研究剋隆瞭PLRV分離物外殼蛋白和17k蛋白基因的序列,為進一步進行抗PLRV基因工程研究奠定基礎.
종전형적마령서권협병독병주중직접제취출식물총RNA,근거PLRV외각단백기인서렬,설계합성료일대과핵감산인물,경RT-PCR법확증출전장적cDNA편단,장기극륭도질립pGEM-3Zf(+)상,병진행료서렬분석.결과표명,극륭적cDNA편단유627개핵감산조성,편마208개안기산조성적이론분자량위23k적단백,여PLRV외각단백적대소일치;차외극륭편단환함유일개불동우외각단백기인적열독광가,해광가유465개핵감산조성,편마155개안기산조성적이론분자량위17k적단백,여PLRV적17k단백대소일치.여국외보도적궤개주계상비,PLRV분리물적외각단백기인급17k단백기인적핵감산동원솔분별고체97.5%～99.7%화96.5%～99.6%,유차추측적안기산동원솔고체97.6%～99.5%화96.1%～99.4%,설명소극륭적PLRV외각단백기인화17k단백기인구유고도적보수성,본연구극륭료PLRV분리물외각단백화17k단백기인적서렬,위진일보진행항PLRV기인공정연구전정기출.
