佛山科学技术学院学报(自然科学版)
彿山科學技術學院學報(自然科學版)
불산과학기술학원학보(자연과학판)
JOURNAL OF FOSHAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2002年
2期
64-69
,共6页
唐冬生%施家琦%田允波%顾万军
唐鼕生%施傢琦%田允波%顧萬軍
당동생%시가기%전윤파%고만군
多位点%基因打靶%体细胞%多拷贝序列
多位點%基因打靶%體細胞%多拷貝序列
다위점%기인타파%체세포%다고패서렬
该研究利用多拷贝序列作为靶位点进行多位点基因打靶技术的研究.通过显微切割、菌落杂交、Southern杂交等方法获得人类D,G组染色体短臂多拷贝序列(DGMS),然后利用DGMS构建含Neo/TK基因正负选择系统的基因打靶载体.采用电穿孔、G418和GCV筛选进行Neo基因的基因打靶,并经PCR,FISH定位,Neo基因表达等证实Neo基因定点整合到D,G 组染色体短臂且表达;最终建立了一种有效的、多个安全位点的基因打靶技术.该技术可应用于体外细胞和动植物的转基因,甚至人类的基因治疗.
該研究利用多拷貝序列作為靶位點進行多位點基因打靶技術的研究.通過顯微切割、菌落雜交、Southern雜交等方法穫得人類D,G組染色體短臂多拷貝序列(DGMS),然後利用DGMS構建含Neo/TK基因正負選擇繫統的基因打靶載體.採用電穿孔、G418和GCV篩選進行Neo基因的基因打靶,併經PCR,FISH定位,Neo基因錶達等證實Neo基因定點整閤到D,G 組染色體短臂且錶達;最終建立瞭一種有效的、多箇安全位點的基因打靶技術.該技術可應用于體外細胞和動植物的轉基因,甚至人類的基因治療.
해연구이용다고패서렬작위파위점진행다위점기인타파기술적연구.통과현미절할、균락잡교、Southern잡교등방법획득인류D,G조염색체단비다고패서렬(DGMS),연후이용DGMS구건함Neo/TK기인정부선택계통적기인타파재체.채용전천공、G418화GCV사선진행Neo기인적기인타파,병경PCR,FISH정위,Neo기인표체등증실Neo기인정점정합도D,G 조염색체단비차표체;최종건립료일충유효적、다개안전위점적기인타파기술.해기술가응용우체외세포화동식물적전기인,심지인류적기인치료.
