中国肺癌杂志
中國肺癌雜誌
중국폐암잡지
CHINESE JOURNAL OF LUNG CANCER
2002年
1期
1-5
,共5页
汪惠%赖百塘%李金照%杨学惠%张春彦%湛秀萍%王玥
汪惠%賴百塘%李金照%楊學惠%張春彥%湛秀萍%王玥
왕혜%뢰백당%리금조%양학혜%장춘언%담수평%왕모
p53反义RNA%转染细胞%表型%顺铂敏感性
p53反義RNA%轉染細胞%錶型%順鉑敏感性
p53반의RNA%전염세포%표형%순박민감성
目的研究外源p53反义RNA对有p53基因248密码点突变的人肺癌细胞系恶性表型和顺铂敏感性的影响.方法构建p53反义RNA真核细胞表达载体PEGFP-p53(AS),经酶切图证明反向联结质粒.Lipofectin介导转染有p53基因248密码点突变的人肺癌细胞系801D,经G418筛选获耐受克隆.稀释法建立单细胞克隆系,应用PCR检测外源基因,荧光显微镜检测细胞绿色荧光蛋白表达,p53单抗免疫组化染色检测p53突变蛋白表达,体外集落形成实验检测细胞生长,流式细胞仪检测细胞周期,MTT法检测细胞对顺铂药物敏感性.结果酶切图证明了p53-cDNA反向联结于质粒,构建了PEGFP-p53(AS),并建立了转染单细胞克隆系PEGFP-p53(AS)-801D及空载细胞系PEGFP-801D.PCR检测外源p53基因和neo基因存在于转染细胞系,而荧光显微镜下发现其胞浆有绿荧光蛋白表达.免疫组化染色p53突变蛋白在801D细胞系为阳性,而PEGFP-p53(AS)-801D为阴性,证明外源反义p53在转染细胞稳定表达并封闭内源突变蛋白表达.与母系相比,PEGFP-p53(AS)-801D集落形成抑制率为61%(P＜0.01),流式细胞仪检测该细胞系G1期细胞数明显增加,出现G1期阻滞的表现.MTT检测PEGFP-p53(AS)-801D对顺铂比母系更为敏感.结论有p53基因248密码点突变的801D细胞恶性增殖明显,对顺铂耐药,外源p53反义RNA可封闭突变蛋白表达,抑制细胞体外恶性增殖,增加对顺铂的药物敏感性.转染p53反义RNA可抑制p53突变的恶性表型或恢复野生型p53基因功能.
目的研究外源p53反義RNA對有p53基因248密碼點突變的人肺癌細胞繫噁性錶型和順鉑敏感性的影響.方法構建p53反義RNA真覈細胞錶達載體PEGFP-p53(AS),經酶切圖證明反嚮聯結質粒.Lipofectin介導轉染有p53基因248密碼點突變的人肺癌細胞繫801D,經G418篩選穫耐受剋隆.稀釋法建立單細胞剋隆繫,應用PCR檢測外源基因,熒光顯微鏡檢測細胞綠色熒光蛋白錶達,p53單抗免疫組化染色檢測p53突變蛋白錶達,體外集落形成實驗檢測細胞生長,流式細胞儀檢測細胞週期,MTT法檢測細胞對順鉑藥物敏感性.結果酶切圖證明瞭p53-cDNA反嚮聯結于質粒,構建瞭PEGFP-p53(AS),併建立瞭轉染單細胞剋隆繫PEGFP-p53(AS)-801D及空載細胞繫PEGFP-801D.PCR檢測外源p53基因和neo基因存在于轉染細胞繫,而熒光顯微鏡下髮現其胞漿有綠熒光蛋白錶達.免疫組化染色p53突變蛋白在801D細胞繫為暘性,而PEGFP-p53(AS)-801D為陰性,證明外源反義p53在轉染細胞穩定錶達併封閉內源突變蛋白錶達.與母繫相比,PEGFP-p53(AS)-801D集落形成抑製率為61%(P＜0.01),流式細胞儀檢測該細胞繫G1期細胞數明顯增加,齣現G1期阻滯的錶現.MTT檢測PEGFP-p53(AS)-801D對順鉑比母繫更為敏感.結論有p53基因248密碼點突變的801D細胞噁性增殖明顯,對順鉑耐藥,外源p53反義RNA可封閉突變蛋白錶達,抑製細胞體外噁性增殖,增加對順鉑的藥物敏感性.轉染p53反義RNA可抑製p53突變的噁性錶型或恢複野生型p53基因功能.
목적연구외원p53반의RNA대유p53기인248밀마점돌변적인폐암세포계악성표형화순박민감성적영향.방법구건p53반의RNA진핵세포표체재체PEGFP-p53(AS),경매절도증명반향련결질립.Lipofectin개도전염유p53기인248밀마점돌변적인폐암세포계801D,경G418사선획내수극륭.희석법건립단세포극륭계,응용PCR검측외원기인,형광현미경검측세포록색형광단백표체,p53단항면역조화염색검측p53돌변단백표체,체외집락형성실험검측세포생장,류식세포의검측세포주기,MTT법검측세포대순박약물민감성.결과매절도증명료p53-cDNA반향련결우질립,구건료PEGFP-p53(AS),병건립료전염단세포극륭계PEGFP-p53(AS)-801D급공재세포계PEGFP-801D.PCR검측외원p53기인화neo기인존재우전염세포계,이형광현미경하발현기포장유록형광단백표체.면역조화염색p53돌변단백재801D세포계위양성,이PEGFP-p53(AS)-801D위음성,증명외원반의p53재전염세포은정표체병봉폐내원돌변단백표체.여모계상비,PEGFP-p53(AS)-801D집락형성억제솔위61%(P＜0.01),류식세포의검측해세포계G1기세포수명현증가,출현G1기조체적표현.MTT검측PEGFP-p53(AS)-801D대순박비모계경위민감.결론유p53기인248밀마점돌변적801D세포악성증식명현,대순박내약,외원p53반의RNA가봉폐돌변단백표체,억제세포체외악성증식,증가대순박적약물민감성.전염p53반의RNA가억제p53돌변적악성표형혹회복야생형p53기인공능.
