生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2002年
1期
2-4
,共3页
袁勇芳%许杨%李思光%汤祖辉
袁勇芳%許楊%李思光%湯祖輝
원용방%허양%리사광%탕조휘
红曲霉%RAPD-PCR%DNA提取%氯化苄
紅麯黴%RAPD-PCR%DNA提取%氯化芐
홍곡매%RAPD-PCR%DNA제취%록화변
采用改进的氯化苄法对红曲霉DNA进行提取纯化,探讨了提取液中EDTA的浓度以及其他因素对提取结果的影响.同时,以该法提取的DNA为模板,采用正交实验优化RAPD分析最佳反应条件.结果表明,当提取液中EDTA浓度为125mmol/l时,所得的红曲霉DNA的质量和数量均较理想,每克红曲霉菌丝体(湿重)能提取到50μg的DNA,分子量约为25kb,以此DNA为模板进行PCR扩增,其最佳反应体系为:Mg2+2.0mmol/l,dNTPs 0.15mmol/l,Taq 0.05U/μl,模板DNA 1.2ng/μl,随机引物 0.36μmol/l,Tris-HCl 10mmol/l pH9.0,KCl 50mmol/l,Nonidet P40 0.1%.另外,通过对比RNA酶消化前后的模板扩增结果证明了本实验酶的消化的必要性,对比了不同预变性时间处理模板对RAPD-PCR扩增的影响,发现不经过预变性的模板扩增结果最理想.
採用改進的氯化芐法對紅麯黴DNA進行提取純化,探討瞭提取液中EDTA的濃度以及其他因素對提取結果的影響.同時,以該法提取的DNA為模闆,採用正交實驗優化RAPD分析最佳反應條件.結果錶明,噹提取液中EDTA濃度為125mmol/l時,所得的紅麯黴DNA的質量和數量均較理想,每剋紅麯黴菌絲體(濕重)能提取到50μg的DNA,分子量約為25kb,以此DNA為模闆進行PCR擴增,其最佳反應體繫為:Mg2+2.0mmol/l,dNTPs 0.15mmol/l,Taq 0.05U/μl,模闆DNA 1.2ng/μl,隨機引物 0.36μmol/l,Tris-HCl 10mmol/l pH9.0,KCl 50mmol/l,Nonidet P40 0.1%.另外,通過對比RNA酶消化前後的模闆擴增結果證明瞭本實驗酶的消化的必要性,對比瞭不同預變性時間處理模闆對RAPD-PCR擴增的影響,髮現不經過預變性的模闆擴增結果最理想.
채용개진적록화변법대홍곡매DNA진행제취순화,탐토료제취액중EDTA적농도이급기타인소대제취결과적영향.동시,이해법제취적DNA위모판,채용정교실험우화RAPD분석최가반응조건.결과표명,당제취액중EDTA농도위125mmol/l시,소득적홍곡매DNA적질량화수량균교이상,매극홍곡매균사체(습중)능제취도50μg적DNA,분자량약위25kb,이차DNA위모판진행PCR확증,기최가반응체계위:Mg2+2.0mmol/l,dNTPs 0.15mmol/l,Taq 0.05U/μl,모판DNA 1.2ng/μl,수궤인물 0.36μmol/l,Tris-HCl 10mmol/l pH9.0,KCl 50mmol/l,Nonidet P40 0.1%.령외,통과대비RNA매소화전후적모판확증결과증명료본실험매적소화적필요성,대비료불동예변성시간처리모판대RAPD-PCR확증적영향,발현불경과예변성적모판확증결과최이상.
