生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2005年
2期
154-160
,共7页
程洪强%张琛%胡红雨%许根俊
程洪彊%張琛%鬍紅雨%許根俊
정홍강%장침%호홍우%허근준
人X型磷脂酶A2%包涵体%重折叠%L-精氨酸
人X型燐脂酶A2%包涵體%重摺疊%L-精氨痠
인X형린지매A2%포함체%중절첩%L-정안산
人X型磷脂酶A2在大肠杆菌中的表达产物完全以不溶的包涵体形式存在.用以前适用于人胰型(IB型)磷脂酶A2的稀释重折叠方法,并不能使它有效重折叠.以初步纯化的包涵体为对象,发现溶液的温度、pH值和蛋白质浓度对X型磷脂酶A2体外重折叠有很大的影响.研究了一些小分子化合物对X型磷脂酶A2,在高蛋白质浓度(1 g/L)下重折叠的影响,发现1 mo1/L的L-精氨酸能提高其重折叠效率达6倍多.L-精氨酸的结构类似物L-瓜氨酸对X型磷脂酶A2的重折叠有较弱的改善,而L-赖氨酸和L-精氨酸甲基酯则降低了X型磷脂酶A2的活性恢复.结果表明,L-精氨酸对蛋白质重折叠的帮助作用,可能是通过精氨酸与折叠中间物的结合产生的,精氨酸的胍基和羧基都是必需的,其侧链胍基以其特殊的带电方式阻遏了重折叠过程中的积聚和分子间二硫键形成的反应.
人X型燐脂酶A2在大腸桿菌中的錶達產物完全以不溶的包涵體形式存在.用以前適用于人胰型(IB型)燐脂酶A2的稀釋重摺疊方法,併不能使它有效重摺疊.以初步純化的包涵體為對象,髮現溶液的溫度、pH值和蛋白質濃度對X型燐脂酶A2體外重摺疊有很大的影響.研究瞭一些小分子化閤物對X型燐脂酶A2,在高蛋白質濃度(1 g/L)下重摺疊的影響,髮現1 mo1/L的L-精氨痠能提高其重摺疊效率達6倍多.L-精氨痠的結構類似物L-瓜氨痠對X型燐脂酶A2的重摺疊有較弱的改善,而L-賴氨痠和L-精氨痠甲基酯則降低瞭X型燐脂酶A2的活性恢複.結果錶明,L-精氨痠對蛋白質重摺疊的幫助作用,可能是通過精氨痠與摺疊中間物的結閤產生的,精氨痠的胍基和羧基都是必需的,其側鏈胍基以其特殊的帶電方式阻遏瞭重摺疊過程中的積聚和分子間二硫鍵形成的反應.
인X형린지매A2재대장간균중적표체산물완전이불용적포함체형식존재.용이전괄용우인이형(IB형)린지매A2적희석중절첩방법,병불능사타유효중절첩.이초보순화적포함체위대상,발현용액적온도、pH치화단백질농도대X형린지매A2체외중절첩유흔대적영향.연구료일사소분자화합물대X형린지매A2,재고단백질농도(1 g/L)하중절첩적영향,발현1 mo1/L적L-정안산능제고기중절첩효솔체6배다.L-정안산적결구유사물L-과안산대X형린지매A2적중절첩유교약적개선,이L-뢰안산화L-정안산갑기지칙강저료X형린지매A2적활성회복.결과표명,L-정안산대단백질중절첩적방조작용,가능시통과정안산여절첩중간물적결합산생적,정안산적고기화최기도시필수적,기측련고기이기특수적대전방식조알료중절첩과정중적적취화분자간이류건형성적반응.
