中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2006年
5期
390-395
,共6页
蘧艳峰%李卓玉%郭晨云%郭素堂%史天良%袁静明
蘧豔峰%李卓玉%郭晨雲%郭素堂%史天良%袁靜明
거염봉%리탁옥%곽신운%곽소당%사천량%원정명
截短型gelonin%纯化%构象%类DNase活性%肿瘤细胞抑制
截短型gelonin%純化%構象%類DNase活性%腫瘤細胞抑製
절단형gelonin%순화%구상%류DNase활성%종류세포억제
为了探索免疫络合物中具杀伤靶细胞的毒素,gelonin的结构与功能的关系,根据化学合成的gelonin基因序列和3维分子构象设计了N端区Gly,Leu,Asp和/或C端区Asp,Lys,Asp,Pro,Lys缺失的gelonin.以重组质粒pE-gel为模板,在相应引物存在下,用PCR法获得5'端区和/或3'端区碱基序列缺失的gelonin基因片段.经克隆、表达和纯化得到3种截短型gelonin(G-N3、G-C5、G-N3C5).CD谱和荧光谱表明,完整型gelonin(G-O)与截短型gelonin的分子构象有明显的差异.它们的构象变化与类DNase活性和抑制肿瘤细胞生长的能力均为G-O≥G-N3＞G-C5＞G-N3C5.结果再一次证明了具有α+β型结构蛋白,gelonin的构象与生物活性的一致性.
為瞭探索免疫絡閤物中具殺傷靶細胞的毒素,gelonin的結構與功能的關繫,根據化學閤成的gelonin基因序列和3維分子構象設計瞭N耑區Gly,Leu,Asp和/或C耑區Asp,Lys,Asp,Pro,Lys缺失的gelonin.以重組質粒pE-gel為模闆,在相應引物存在下,用PCR法穫得5'耑區和/或3'耑區堿基序列缺失的gelonin基因片段.經剋隆、錶達和純化得到3種截短型gelonin(G-N3、G-C5、G-N3C5).CD譜和熒光譜錶明,完整型gelonin(G-O)與截短型gelonin的分子構象有明顯的差異.它們的構象變化與類DNase活性和抑製腫瘤細胞生長的能力均為G-O≥G-N3＞G-C5＞G-N3C5.結果再一次證明瞭具有α+β型結構蛋白,gelonin的構象與生物活性的一緻性.
위료탐색면역락합물중구살상파세포적독소,gelonin적결구여공능적관계,근거화학합성적gelonin기인서렬화3유분자구상설계료N단구Gly,Leu,Asp화/혹C단구Asp,Lys,Asp,Pro,Lys결실적gelonin.이중조질립pE-gel위모판,재상응인물존재하,용PCR법획득5'단구화/혹3'단구감기서렬결실적gelonin기인편단.경극륭、표체화순화득도3충절단형gelonin(G-N3、G-C5、G-N3C5).CD보화형광보표명,완정형gelonin(G-O)여절단형gelonin적분자구상유명현적차이.타문적구상변화여류DNase활성화억제종류세포생장적능력균위G-O≥G-N3＞G-C5＞G-N3C5.결과재일차증명료구유α+β형결구단백,gelonin적구상여생물활성적일치성.
