医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2008年
1期
35-39
,共5页
夏文豪%吕玲肖%刘志国%屈伸
夏文豪%呂玲肖%劉誌國%屈伸
하문호%려령초%류지국%굴신
极低密度脂蛋白受体%配体结合结构域%基因克隆%蛋白纯化
極低密度脂蛋白受體%配體結閤結構域%基因剋隆%蛋白純化
겁저밀도지단백수체%배체결합결구역%기인극륭%단백순화
目的 构建含VLDL-R配体结合结构域融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达与纯化.方法 利用PCR技术扩增LBR1-8的DNA片段,将其克隆至原核表达载体pET28a (+)中,随后将阳性重组质粒转化到大肠埃希菌Rosetta中,利用IPTG诱导蛋白表达并优化其表达条件,表达产物经Ni+-NTA亲和层析柱纯化回收,并采用SDS-PAGE和Western 印迹对目的 蛋白进行分析和鉴定.结果 构建的重组表达质粒经PCR,酶切和DNA测序鉴定与预期的结果一致,含有重组质粒的表达宿主经过IPTG诱导成功表达了LBR1-8,并经优化确定了最佳的诱导表达条件.结论 成功构建pET28a (+)-LBR1-8表达质粒,表达并经纯化得到了LBR1-8.
目的 構建含VLDL-R配體結閤結構域融閤蛋白錶達載體,併在大腸埃希菌中進行錶達與純化.方法 利用PCR技術擴增LBR1-8的DNA片段,將其剋隆至原覈錶達載體pET28a (+)中,隨後將暘性重組質粒轉化到大腸埃希菌Rosetta中,利用IPTG誘導蛋白錶達併優化其錶達條件,錶達產物經Ni+-NTA親和層析柱純化迴收,併採用SDS-PAGE和Western 印跡對目的 蛋白進行分析和鑒定.結果 構建的重組錶達質粒經PCR,酶切和DNA測序鑒定與預期的結果一緻,含有重組質粒的錶達宿主經過IPTG誘導成功錶達瞭LBR1-8,併經優化確定瞭最佳的誘導錶達條件.結論 成功構建pET28a (+)-LBR1-8錶達質粒,錶達併經純化得到瞭LBR1-8.
목적 구건함VLDL-R배체결합결구역융합단백표체재체,병재대장애희균중진행표체여순화.방법 이용PCR기술확증LBR1-8적DNA편단,장기극륭지원핵표체재체pET28a (+)중,수후장양성중조질립전화도대장애희균Rosetta중,이용IPTG유도단백표체병우화기표체조건,표체산물경Ni+-NTA친화층석주순화회수,병채용SDS-PAGE화Western 인적대목적 단백진행분석화감정.결과 구건적중조표체질립경PCR,매절화DNA측서감정여예기적결과일치,함유중조질립적표체숙주경과IPTG유도성공표체료LBR1-8,병경우화학정료최가적유도표체조건.결론 성공구건pET28a (+)-LBR1-8표체질립,표체병경순화득도료LBR1-8.
