微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2008年
2期
191-196
,共6页
余蔚%姚勤%郭忠建%包方%尹慧娟%陈克平
餘蔚%姚勤%郭忠建%包方%尹慧娟%陳剋平
여위%요근%곽충건%포방%윤혜연%진극평
家蚕浓核病毒%非结构蛋白1%表达%杆状病毒表达系统%Western blot
傢蠶濃覈病毒%非結構蛋白1%錶達%桿狀病毒錶達繫統%Western blot
가잠농핵병독%비결구단백1%표체%간상병독표체계통%Western blot
利用PCR技术扩增出BmDNV-3 NS1基因,将目的基因与原核表达载体pET-30a进行连接,转化BL21 star菌并在该菌中表达,经Western blot鉴定表达的产物为BmDNV-3 NS1蛋白,纯化NS1蛋白并制备兔多克隆抗体.同时BmDNV-3 NS1基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBae-HTb-eGFP中,转化BmDH10BAC感受态细胞,提取的重组Bacmid通过脂质体包埋转染家蚕BmN细胞,再以收获的重组病毒感染家蚕幼虫.家蚕BmN细胞和幼虫感染重组病毒2d后均观察到绿色荧光,经SDS-PAGE分析真核表达的产物与预测的NS1-eGFP融合蛋白大小不一致,说明NS1-eGFP融合蛋白被昆虫内源性的蛋白酶降解.降解的产物用NS1蛋白抗体进行Western blot鉴定为BmDNV-3 NS1蛋白.
利用PCR技術擴增齣BmDNV-3 NS1基因,將目的基因與原覈錶達載體pET-30a進行連接,轉化BL21 star菌併在該菌中錶達,經Western blot鑒定錶達的產物為BmDNV-3 NS1蛋白,純化NS1蛋白併製備兔多剋隆抗體.同時BmDNV-3 NS1基因亞剋隆到桿狀病毒轉移載體pFastBae-HTb-eGFP中,轉化BmDH10BAC感受態細胞,提取的重組Bacmid通過脂質體包埋轉染傢蠶BmN細胞,再以收穫的重組病毒感染傢蠶幼蟲.傢蠶BmN細胞和幼蟲感染重組病毒2d後均觀察到綠色熒光,經SDS-PAGE分析真覈錶達的產物與預測的NS1-eGFP融閤蛋白大小不一緻,說明NS1-eGFP融閤蛋白被昆蟲內源性的蛋白酶降解.降解的產物用NS1蛋白抗體進行Western blot鑒定為BmDNV-3 NS1蛋白.
이용PCR기술확증출BmDNV-3 NS1기인,장목적기인여원핵표체재체pET-30a진행련접,전화BL21 star균병재해균중표체,경Western blot감정표체적산물위BmDNV-3 NS1단백,순화NS1단백병제비토다극륭항체.동시BmDNV-3 NS1기인아극륭도간상병독전이재체pFastBae-HTb-eGFP중,전화BmDH10BAC감수태세포,제취적중조Bacmid통과지질체포매전염가잠BmN세포,재이수획적중조병독감염가잠유충.가잠BmN세포화유충감염중조병독2d후균관찰도록색형광,경SDS-PAGE분석진핵표체적산물여예측적NS1-eGFP융합단백대소불일치,설명NS1-eGFP융합단백피곤충내원성적단백매강해.강해적산물용NS1단백항체진행Western blot감정위BmDNV-3 NS1단백.
