医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2009年
2期
101-105
,共5页
王翀%刘北忠%金丹婷%王春光%吴燕%朱丹%钟梁
王翀%劉北忠%金丹婷%王春光%吳燕%硃丹%鐘樑
왕충%류북충%금단정%왕춘광%오연%주단%종량
早幼粒细胞白血病基因%结构域%载体构建
早幼粒細胞白血病基因%結構域%載體構建
조유립세포백혈병기인%결구역%재체구건
目的 研究早幼粒细胞白血病基因(promyelocytic leukemia,PML)中含环指/B-BOX结构与含coiled-coil结构的两个结构域的功能,构建含其结构域序列的诱饵表达载体,为进一步应用酵母双杂交系统筛选与之相互作用的蛋白建立实验基础.方法 PCR扩增PML的两个结构域序列,克隆入诱饵载体pGBKT7中,经测序鉴定后,将诱饵载体转化到酵母细胞AH109中,检测诱饵蛋白有无毒性,渗漏和自激活作用,同时利用蛋白印迹法分析诱饵蛋白的表达.结果 成功扩增了PML两个结构域的基因片段,并正确克隆入pGBKT7中.诱饵载体成功转化到酵母细胞AH109中,其中一个诱饵蛋白BD-PML-B无毒性,但具有渗漏和自激活作用,另一个诱饵蛋白BD-PML-C无毒性,渗漏和自激活作用,蛋白印迹法分析证实酵母细胞表达诱饵蛋白.结论 含环指/B-BOX的结构域具有转录因子活性,全长PML的转录活性与之有关;成功构建了含coiled-coil结构的PML结合域的酵母诱饵表达载体,为运用酵母双杂交技术筛选与之作用的蛋白并探讨其功能奠定了基础.
目的 研究早幼粒細胞白血病基因(promyelocytic leukemia,PML)中含環指/B-BOX結構與含coiled-coil結構的兩箇結構域的功能,構建含其結構域序列的誘餌錶達載體,為進一步應用酵母雙雜交繫統篩選與之相互作用的蛋白建立實驗基礎.方法 PCR擴增PML的兩箇結構域序列,剋隆入誘餌載體pGBKT7中,經測序鑒定後,將誘餌載體轉化到酵母細胞AH109中,檢測誘餌蛋白有無毒性,滲漏和自激活作用,同時利用蛋白印跡法分析誘餌蛋白的錶達.結果 成功擴增瞭PML兩箇結構域的基因片段,併正確剋隆入pGBKT7中.誘餌載體成功轉化到酵母細胞AH109中,其中一箇誘餌蛋白BD-PML-B無毒性,但具有滲漏和自激活作用,另一箇誘餌蛋白BD-PML-C無毒性,滲漏和自激活作用,蛋白印跡法分析證實酵母細胞錶達誘餌蛋白.結論 含環指/B-BOX的結構域具有轉錄因子活性,全長PML的轉錄活性與之有關;成功構建瞭含coiled-coil結構的PML結閤域的酵母誘餌錶達載體,為運用酵母雙雜交技術篩選與之作用的蛋白併探討其功能奠定瞭基礎.
목적 연구조유립세포백혈병기인(promyelocytic leukemia,PML)중함배지/B-BOX결구여함coiled-coil결구적량개결구역적공능,구건함기결구역서렬적유이표체재체,위진일보응용효모쌍잡교계통사선여지상호작용적단백건립실험기출.방법 PCR확증PML적량개결구역서렬,극륭입유이재체pGBKT7중,경측서감정후,장유이재체전화도효모세포AH109중,검측유이단백유무독성,삼루화자격활작용,동시이용단백인적법분석유이단백적표체.결과 성공확증료PML량개결구역적기인편단,병정학극륭입pGBKT7중.유이재체성공전화도효모세포AH109중,기중일개유이단백BD-PML-B무독성,단구유삼루화자격활작용,령일개유이단백BD-PML-C무독성,삼루화자격활작용,단백인적법분석증실효모세포표체유이단백.결론 함배지/B-BOX적결구역구유전록인자활성,전장PML적전록활성여지유관;성공구건료함coiled-coil결구적PML결합역적효모유이표체재체,위운용효모쌍잡교기술사선여지작용적단백병탐토기공능전정료기출.
