实用预防医学
實用預防醫學
실용예방의학
PRACTICAL PREVENTIVE MEDICINE
2010年
10期
1961-1964
,共4页
HIV-1 Tat%载体构建%huh-7细胞%表达
HIV-1 Tat%載體構建%huh-7細胞%錶達
HIV-1 Tat%재체구건%huh-7세포%표체
目的 构建人类免疫缺陷病毒Tat基因真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞中的有效表达.方法 以含有HIV-1全长基因的质粒pNL4～3为模板,通过PCR扩增HIV-1 Tat第一外显子,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-tat,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,应用脂质体转染技术转染入huh-7细胞.RT-PCR检测其基因转录情况,Webtern Blot鉴定其是否能够表达相应的目的蛋白质.结果 成功扩增了Tat基因,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pcDNA3.1-tat,RT-PCR和Western blot方法证实该质粒能在huh-7真核细胞中有效表达HIV-1 Tat目的蛋白质.结论 成功构建了HIV-1 Tat基因的真核表达质粒载体,并在huh-7中表达,为在huh-7细胞模型中研究Tat的功能奠定了基础.
目的 構建人類免疫缺陷病毒Tat基因真覈錶達質粒,併研究該質粒在真覈細胞中的有效錶達.方法 以含有HIV-1全長基因的質粒pNL4～3為模闆,通過PCR擴增HIV-1 Tat第一外顯子,應用基因工程技術將擴增的基因片段插入真覈錶達質粒pcDNA3.1(+),構建重組真覈錶達質粒pcDNA3.1-tat,經限製性內切酶酶切分析及測序鑒定正確後,應用脂質體轉染技術轉染入huh-7細胞.RT-PCR檢測其基因轉錄情況,Webtern Blot鑒定其是否能夠錶達相應的目的蛋白質.結果 成功擴增瞭Tat基因,酶切和測序證明正確構建瞭重組真覈錶達質粒pcDNA3.1-tat,RT-PCR和Western blot方法證實該質粒能在huh-7真覈細胞中有效錶達HIV-1 Tat目的蛋白質.結論 成功構建瞭HIV-1 Tat基因的真覈錶達質粒載體,併在huh-7中錶達,為在huh-7細胞模型中研究Tat的功能奠定瞭基礎.
목적 구건인류면역결함병독Tat기인진핵표체질립,병연구해질립재진핵세포중적유효표체.방법 이함유HIV-1전장기인적질립pNL4～3위모판,통과PCR확증HIV-1 Tat제일외현자,응용기인공정기술장확증적기인편단삽입진핵표체질립pcDNA3.1(+),구건중조진핵표체질립pcDNA3.1-tat,경한제성내절매매절분석급측서감정정학후,응용지질체전염기술전염입huh-7세포.RT-PCR검측기기인전록정황,Webtern Blot감정기시부능구표체상응적목적단백질.결과 성공확증료Tat기인,매절화측서증명정학구건료중조진핵표체질립pcDNA3.1-tat,RT-PCR화Western blot방법증실해질립능재huh-7진핵세포중유효표체HIV-1 Tat목적단백질.결론 성공구건료HIV-1 Tat기인적진핵표체질립재체,병재huh-7중표체,위재huh-7세포모형중연구Tat적공능전정료기출.
