CAJ | 학술논문

目的:研究肝癌顺铂耐药细胞HepG2/cDDP中人肝再生增强因子(Human augmenter of liver regeneration,hALR)对细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP450)表达的影响,观察ALR是否通过作用CYP450与肝癌细胞耐药的形成有关.方法:建立体外肝癌顺铂耐药细胞系,MTT检测耐药指数;将构建好的人肝再生增强因子siRNA表达质粒psiALR-A及其阴性对照质粒psiALR-B采用脂质体转染的方法分别转染至HepG2/cDDP细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,计算转染效率.根据转染不同的质粒,将HepG2/cDDP细胞分为3组:转染组(转染psiALR-A),对照组(转染psiALR-B),空白组(未转染重组质粒).免疫细胞化学法、免疫印迹法、实时荧光定量PCR法检测转染细胞中hALR和CYP450的表达,化学发光法检测各组细胞中CYP3A4的活性,MTT比色法检测各组细胞对顺铂敏感性的变化.结果:耐药模型成功建立,耐药指数为6.26;成功转染质粒psiALR-A和psiALR-B;转染组细胞中hALR表达明显减少,CYP450的表达明显增加,活性升高,而对照组和空白组细胞中hALR和CYP450表达没有明显的变化.MTT结果显示转染组细胞对顺铂的敏感性降低,对照组和空白组细胞对顺铂的敏感性没有明显变化.结论:阻断人肝再生增强因子的表达后,HepG2/cDDP细胞CYP450表达明显增加,活性增强,对顺铂的敏感性下降,ALR可能通过作用CYP450在肝癌细胞耐药的发生发展中起着重要作用.
목적:연구간암순박내약세포HepG2/cDDP중인간재생증강인자(Human augmenter of liver regeneration,hALR)대세포색소P450(Cytochrome P450,CYP450)표체적영향,관찰ALR시부통과작용CYP450여간암세포내약적형성유관.방법:건입체외간암순박내약세포계,MTT검측내약지수;장구건호적인간재생증강인자siRNA표체질립psiALR-A급기음성대조질립psiALR-B채용지질체전염적방법분별전염지HepG2/cDDP세포,형광현미경관찰록색형광단백적표체,계산전염효솔.근거전염불동적질립,장HepG2/cDDP세포분위3조:전염조(전염psiALR-A),대조조(전염psiALR-B),공백조(미전염중조질립).면역세포화학법、면역인적법、실시형광정량PCR법검측전염세포중hALR화CYP450적표체,화학발광법검측각조세포중CYP3A4적활성,MTT비색법검측각조세포대순박민감성적변화.결과:내약모형성공건립,내약지수위6.26;성공전염질립psiALR-A화psiALR-B;전염조세포중hALR표체명현감소,CYP450적표체명현증가,활성승고,이대조조화공백조세포중hALR화CYP450표체몰유명현적변화.MTT결과현시전염조세포대순박적민감성강저,대조조화공백조세포대순박적민감성몰유명현변화.결론:조단인간재생증강인자적표체후,HepG2/cDDP세포CYP450표체명현증가,활성증강,대순박적민감성하강,ALR가능통과작용CYP450재간암세포내약적발생발전중기착중요작용.