CAJ | 학술논문

为了探索flhA基因在荧光假单胞菌7-14(Pf7-14)鞭毛合成的作用,以铜绿假单胞菌UCBPP-PA14的鞭毛蛋白FlhA(NC_008463.1)为诱饵,在荧光假单胞菌Pf-5(NC_004129)、Pf0-1(NC_007492)和SBW25(NC_012660)的伞基因组中进行BLASTP比对分析,结果在Pf-5、Pf0-1和SBW25的全基因组搜索到flhA的同系物,分别命名为flhAPf-5、flhAPf0-1,和flhASBW25.根据三者的核酸序列,设计简并引物flhA-F/flhA-R,以荧光假单胞菌7-14(Pf7-14)基凶组DNA为模板进行PCR扩增,并对得到的片段测序比对,发现该片段2 130 bp为一完整的开放阅读框,命名为flhAPf7-14.flhAPf7-14在氨基酸水平上与flhAPf-5和flhAPf0-1的同源性分别达到93%和94%.Southern杂交证明flhA 在Pf7-14基因组中为单一拷贝.通过同源重组单交换的方式构建了Pf7-14flhA基因插入失活突变株,结果表明flhA突变体缺失了鞭毛装置并丧失了游动性,而互补菌株则恢复了鞭毛合成能力和游动能力.本研究为今后进一步研究Pf7-14鞭毛合成、菌体游动性与该菌定殖能力及生防能力的关系奠定基础.
위료탐색flhA기인재형광가단포균7-14(Pf7-14)편모합성적작용,이동록가단포균UCBPP-PA14적편모단백FlhA(NC_008463.1)위유이,재형광가단포균Pf-5(NC_004129)、Pf0-1(NC_007492)화SBW25(NC_012660)적산기인조중진행BLASTP비대분석,결과재Pf-5、Pf0-1화SBW25적전기인조수색도flhA적동계물,분별명명위flhAPf-5、flhAPf0-1,화flhASBW25.근거삼자적핵산서렬,설계간병인물flhA-F/flhA-R,이형광가단포균7-14(Pf7-14)기흉조DNA위모판진행PCR확증,병대득도적편단측서비대,발현해편단2 130 bp위일완정적개방열독광,명명위flhAPf7-14.flhAPf7-14재안기산수평상여flhAPf-5화flhAPf0-1적동원성분별체도93%화94%.Southern잡교증명flhA 재Pf7-14기인조중위단일고패.통과동원중조단교환적방식구건료Pf7-14flhA기인삽입실활돌변주,결과표명flhA돌변체결실료편모장치병상실료유동성,이호보균주칙회복료편모합성능력화유동능력.본연구위금후진일보연구Pf7-14편모합성、균체유동성여해균정식능력급생방능력적관계전정기출.