中国血液流变学杂志
中國血液流變學雜誌
중국혈액류변학잡지
CHINESE JOURNAL OF HEMORHEOLOGY
2011年
3期
379-383
,共5页
邱天宇%陈永井%张光波%孙静%蒋俊华%周迎会%张学光
邱天宇%陳永井%張光波%孫靜%蔣俊華%週迎會%張學光
구천우%진영정%장광파%손정%장준화%주영회%장학광
2IgB7-H3%4IgB7-H3%T细胞%协同刺激%T细胞增殖
2IgB7-H3%4IgB7-H3%T細胞%協同刺激%T細胞增殖
2IgB7-H3%4IgB7-H3%T세포%협동자격%T세포증식
目的 建立2IgB7-H3基因转染细胞株和4IgB7-H3基因转染细胞株,探讨B7-H3两种异构体对T细胞的协同刺激作用.方法 RT-PCR 法从诱导成熟的DC细胞中克隆人B7-H3两种异构体基因2IgB7-H3和4IgB7-H3的编码区,经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后插入pIRES2-EGFP真核表达载体构建pIRES2-EGFP/2IgB7-H3和pIRES2-EGFP/4IgB7-H3重组子,采用脂质体法转染脑胶质瘤细胞株SHG44.经G418抗性筛选,采用免疫荧光标记和流式细胞术分析2IgB7-H3和4IgB7-H3在SHG44细胞上的表达.继而,利用MTT法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)分析两种异构体基因转染细胞株对T细胞体外增殖和细胞因子的分泌.结果 成功构建了可以稳定表达2IgB7-H3和4IgB7-H3的基因转染细胞株.体外生物学功能分析表明,与转染空载体的SHG44/mock细胞相比,SHG44/2IgB7-H3和SHG44/4IgB7-H3均能有效抑制T细胞增殖以及对IFN-γ的分泌,且两者的协同抑制作用不存在显著差异.结论 B7-H3两种异构体分子均能负性调控T细胞介导的免疫应答,但两者的生物学功能并不存在显著的差异.
目的 建立2IgB7-H3基因轉染細胞株和4IgB7-H3基因轉染細胞株,探討B7-H3兩種異構體對T細胞的協同刺激作用.方法 RT-PCR 法從誘導成熟的DC細胞中剋隆人B7-H3兩種異構體基因2IgB7-H3和4IgB7-H3的編碼區,經EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ雙酶切後插入pIRES2-EGFP真覈錶達載體構建pIRES2-EGFP/2IgB7-H3和pIRES2-EGFP/4IgB7-H3重組子,採用脂質體法轉染腦膠質瘤細胞株SHG44.經G418抗性篩選,採用免疫熒光標記和流式細胞術分析2IgB7-H3和4IgB7-H3在SHG44細胞上的錶達.繼而,利用MTT法和酶聯免疫吸附測定法(ELISA)分析兩種異構體基因轉染細胞株對T細胞體外增殖和細胞因子的分泌.結果 成功構建瞭可以穩定錶達2IgB7-H3和4IgB7-H3的基因轉染細胞株.體外生物學功能分析錶明,與轉染空載體的SHG44/mock細胞相比,SHG44/2IgB7-H3和SHG44/4IgB7-H3均能有效抑製T細胞增殖以及對IFN-γ的分泌,且兩者的協同抑製作用不存在顯著差異.結論 B7-H3兩種異構體分子均能負性調控T細胞介導的免疫應答,但兩者的生物學功能併不存在顯著的差異.
목적 건립2IgB7-H3기인전염세포주화4IgB7-H3기인전염세포주,탐토B7-H3량충이구체대T세포적협동자격작용.방법 RT-PCR 법종유도성숙적DC세포중극륭인B7-H3량충이구체기인2IgB7-H3화4IgB7-H3적편마구,경EcoR Ⅰ화BamH Ⅰ쌍매절후삽입pIRES2-EGFP진핵표체재체구건pIRES2-EGFP/2IgB7-H3화pIRES2-EGFP/4IgB7-H3중조자,채용지질체법전염뇌효질류세포주SHG44.경G418항성사선,채용면역형광표기화류식세포술분석2IgB7-H3화4IgB7-H3재SHG44세포상적표체.계이,이용MTT법화매련면역흡부측정법(ELISA)분석량충이구체기인전염세포주대T세포체외증식화세포인자적분비.결과 성공구건료가이은정표체2IgB7-H3화4IgB7-H3적기인전염세포주.체외생물학공능분석표명,여전염공재체적SHG44/mock세포상비,SHG44/2IgB7-H3화SHG44/4IgB7-H3균능유효억제T세포증식이급대IFN-γ적분비,차량자적협동억제작용불존재현저차이.결론 B7-H3량충이구체분자균능부성조공T세포개도적면역응답,단량자적생물학공능병불존재현저적차이.
