CAJ | 학술논문

目的:构建人肿瘤-睾丸抗原LAGE-1的原核表达质粒,表达、纯化LAGE-1融合蛋白并制备GST-LAGE-1多克隆抗体.方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增人肝癌组织LAGE-1基因3′端片段,连入原核表达载体pGEX-4T-1(+),构建原核表达质粒pGEX-LAGE-1并测序.将该质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导表达,经包涵体透析复性和谷胱甘肽巯基转移酶纯化系统分离纯化目的蛋白.用纯化的融合蛋白GST-LAGE-1免疫新西兰大白兔,间接 ELISA法测定抗体效价,饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体,并采用Western blot检测GST-LAGE-1多克隆抗体特异性.结果:RT-PCR扩增得到LAGE-1基因3′端264 bp片段,测序结果与GenBank公布序列一致;成功构建pGEX-LAGE-1原核表达质粒,含有该质粒的大肠埃希菌经IPTG诱导后表达相对分子质量约为36×103的蛋白,经包涵体复性和GST融合蛋白纯化系统纯化,得到重组蛋白GST-LAGE-1,纯度达90%;制备兔抗GST-LAGE-1抗体,纯化的抗体经Western blot证实可与目的蛋白特异性结合.结论:获得了纯化的肿瘤-睾丸抗原LAGE-1重组蛋白及其特异性多克隆抗体,为进一步研究LAGE-1抗原在肿瘤免疫治疗中的作用奠定基础.
목적:구건인종류-고환항원LAGE-1적원핵표체질립,표체、순화LAGE-1융합단백병제비GST-LAGE-1다극륭항체.방법:역전록취합매련반응(RT-PCR)방법확증인간암조직LAGE-1기인3′단편단,련입원핵표체재체pGEX-4T-1(+),구건원핵표체질립pGEX-LAGE-1병측서.장해질립전화대장애희균BL21(DE3)진행유도표체,경포함체투석복성화곡광감태구기전이매순화계통분리순화목적단백.용순화적융합단백GST-LAGE-1면역신서란대백토,간접 ELISA법측정항체효개,포화류산안침정법순화항체,병채용Western blot검측GST-LAGE-1다극륭항체특이성.결과:RT-PCR확증득도LAGE-1기인3′단264 bp편단,측서결과여GenBank공포서렬일치;성공구건pGEX-LAGE-1원핵표체질립,함유해질립적대장애희균경IPTG유도후표체상대분자질량약위36×103적단백,경포함체복성화GST융합단백순화계통순화,득도중조단백GST-LAGE-1,순도체90%;제비토항GST-LAGE-1항체,순화적항체경Western blot증실가여목적단백특이성결합.결론:획득료순화적종류-고환항원LAGE-1중조단백급기특이성다극륭항체,위진일보연구LAGE-1항원재종류면역치료중적작용전정기출.