科学技术与工程
科學技術與工程
과학기술여공정
SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING
2006年
14期
2024-2027
,共4页
库晓明%田蓉%杨向民%李郁%谬成功%姚西英%陈志南
庫曉明%田蓉%楊嚮民%李鬱%謬成功%姚西英%陳誌南
고효명%전용%양향민%리욱%류성공%요서영%진지남
HAb18G/CD147%EGFP%肝密相关抗原
HAb18G/CD147%EGFP%肝密相關抗原
HAb18G/CD147%EGFP%간밀상관항원
构建肝癌相关抗原HAb18G/CD147全长及缺失片段E51(第22-50位氨基酸缺失)的真核荧光蛋白表达载体,进一步研究该基因在肝细胞肝癌发生中的作用.通过PCR及Overlapping PCR的方法获得目的基因,与荧光载体pEGFP-N1双酶切、连接、转化E.coliJM109,构建含有肝癌相关抗原HAb18G/CD147全长及E51的真核荧光蛋白表达载体.并经限制性酶切及序列分析证明插入是否正确.用阳离子脂质体介导转染COS-7细胞,进行瞬时表达;荧光显微镜观察EGFP表达,通过流式细胞术检测蛋白的表达情况,明胶酶谱法鉴定其功能.成功地构建了真核荧光蛋白表达载体pEGFP-N1/HAb18G、pEGFP-N1/E51,并经限制性酶切及序列分析证明外源基因插入正确;流式细胞术鉴定该蛋白表达正确;功能实验证实缺失片段E51不具有诱导成纤维细胞分泌MMPs的功能.结果显示HAb18G/CD147基因第22-50位氨基酸与其刺激成纤细胞分泌MMP和功能有密切关系.实验结果为HAb18G蛋白分子的生物学功能研究奠定了基础.
構建肝癌相關抗原HAb18G/CD147全長及缺失片段E51(第22-50位氨基痠缺失)的真覈熒光蛋白錶達載體,進一步研究該基因在肝細胞肝癌髮生中的作用.通過PCR及Overlapping PCR的方法穫得目的基因,與熒光載體pEGFP-N1雙酶切、連接、轉化E.coliJM109,構建含有肝癌相關抗原HAb18G/CD147全長及E51的真覈熒光蛋白錶達載體.併經限製性酶切及序列分析證明插入是否正確.用暘離子脂質體介導轉染COS-7細胞,進行瞬時錶達;熒光顯微鏡觀察EGFP錶達,通過流式細胞術檢測蛋白的錶達情況,明膠酶譜法鑒定其功能.成功地構建瞭真覈熒光蛋白錶達載體pEGFP-N1/HAb18G、pEGFP-N1/E51,併經限製性酶切及序列分析證明外源基因插入正確;流式細胞術鑒定該蛋白錶達正確;功能實驗證實缺失片段E51不具有誘導成纖維細胞分泌MMPs的功能.結果顯示HAb18G/CD147基因第22-50位氨基痠與其刺激成纖細胞分泌MMP和功能有密切關繫.實驗結果為HAb18G蛋白分子的生物學功能研究奠定瞭基礎.
구건간암상관항원HAb18G/CD147전장급결실편단E51(제22-50위안기산결실)적진핵형광단백표체재체,진일보연구해기인재간세포간암발생중적작용.통과PCR급Overlapping PCR적방법획득목적기인,여형광재체pEGFP-N1쌍매절、련접、전화E.coliJM109,구건함유간암상관항원HAb18G/CD147전장급E51적진핵형광단백표체재체.병경한제성매절급서렬분석증명삽입시부정학.용양리자지질체개도전염COS-7세포,진행순시표체;형광현미경관찰EGFP표체,통과류식세포술검측단백적표체정황,명효매보법감정기공능.성공지구건료진핵형광단백표체재체pEGFP-N1/HAb18G、pEGFP-N1/E51,병경한제성매절급서렬분석증명외원기인삽입정학;류식세포술감정해단백표체정학;공능실험증실결실편단E51불구유유도성섬유세포분비MMPs적공능.결과현시HAb18G/CD147기인제22-50위안기산여기자격성섬세포분비MMP화공능유밀절관계.실험결과위HAb18G단백분자적생물학공능연구전정료기출.
