中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2007年
11期
2105-2108
,共4页
高伟生%罗荣城%马树东%尤长宣%吕成伟
高偉生%囉榮城%馬樹東%尤長宣%呂成偉
고위생%라영성%마수동%우장선%려성위
树突状细胞%粒细胞巨噬细胞集落刺激因子%白细胞介素4
樹突狀細胞%粒細胞巨噬細胞集落刺激因子%白細胞介素4
수돌상세포%립세포거서세포집락자격인자%백세포개소4
目的:体外分离培养并鉴定人外周血树突状细胞,并观察其抗原呈递功能.方法:实验于2005-05/2006-11在南方医科大学南方医院肿瘤中心生物治疗实验室完成.从人类白细胞抗原A2表达阳性的健康人外周血中分离获得单个核细胞.培养5 h后洗涤贴壁细胞,加入含有10%人AB血清的RPMI1640培养基,及重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素4,于培养的第1,3,6天对树突状细胞的形态、表型进行分析,并定期检测树突状细胞的纯度与得率.抽取与以上树突状细胞不同来源的其他健康人外周血.经淋巴细胞分离液分离后,获取非贴壁细胞,用含10%人AB血清的1640培养基重悬,加入白细胞介素2继续孵育6 d,作为同种异体T淋巴细胞.将树突状细胞分为两组,一组按常规方法培养6 d,另一组在培养至第5天时加入黑色素瘤抗原基因A3编码的多肽继续培养24 h.在经紫外线处理后的96孔板中,分别加入树突状细胞悬液1×104,5×103,2×103,1×103细胞/每孔,以自身T淋巴细胞作为对照,每孔设3个复孔,分别加入1×105淋巴细胞/每孔.评价树突状细胞刺激T淋巴细胞增殖的能力.结果:①单个核细胞体外培养至第6天,可获得大量、90.81%高纯度的树突状细胞,能够较高地表达21.8%CD1a、99.0%HLA-DR、63.4%CD80、18.9%CD83和80.6%CD86.②将诱导培养6 d获得的两组树突状细胞作为刺激细胞,以不同的浓度与同种异体淋巴细胞混合,均可产生增殖反应;经过黑色素瘤抗原基因A3编码的多肽处理的各种比例的树突状细胞,较相应未经黑色素瘤抗原基因A3编码的多肽处理的树突状细胞激发淋巴细胞增殖的能力明显增强,浓度相对较高的树突状细胞刺激效果最明显,能够强烈地激发同种混合淋巴细胞增殖.结论:得到了一群较高程度表达CD83、CD86和HLA-DR分子、体外可强烈激发同种异体T淋巴细胞增殖的树突状细胞群.
目的:體外分離培養併鑒定人外週血樹突狀細胞,併觀察其抗原呈遞功能.方法:實驗于2005-05/2006-11在南方醫科大學南方醫院腫瘤中心生物治療實驗室完成.從人類白細胞抗原A2錶達暘性的健康人外週血中分離穫得單箇覈細胞.培養5 h後洗滌貼壁細胞,加入含有10%人AB血清的RPMI1640培養基,及重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子和重組人白細胞介素4,于培養的第1,3,6天對樹突狀細胞的形態、錶型進行分析,併定期檢測樹突狀細胞的純度與得率.抽取與以上樹突狀細胞不同來源的其他健康人外週血.經淋巴細胞分離液分離後,穫取非貼壁細胞,用含10%人AB血清的1640培養基重懸,加入白細胞介素2繼續孵育6 d,作為同種異體T淋巴細胞.將樹突狀細胞分為兩組,一組按常規方法培養6 d,另一組在培養至第5天時加入黑色素瘤抗原基因A3編碼的多肽繼續培養24 h.在經紫外線處理後的96孔闆中,分彆加入樹突狀細胞懸液1×104,5×103,2×103,1×103細胞/每孔,以自身T淋巴細胞作為對照,每孔設3箇複孔,分彆加入1×105淋巴細胞/每孔.評價樹突狀細胞刺激T淋巴細胞增殖的能力.結果:①單箇覈細胞體外培養至第6天,可穫得大量、90.81%高純度的樹突狀細胞,能夠較高地錶達21.8%CD1a、99.0%HLA-DR、63.4%CD80、18.9%CD83和80.6%CD86.②將誘導培養6 d穫得的兩組樹突狀細胞作為刺激細胞,以不同的濃度與同種異體淋巴細胞混閤,均可產生增殖反應;經過黑色素瘤抗原基因A3編碼的多肽處理的各種比例的樹突狀細胞,較相應未經黑色素瘤抗原基因A3編碼的多肽處理的樹突狀細胞激髮淋巴細胞增殖的能力明顯增彊,濃度相對較高的樹突狀細胞刺激效果最明顯,能夠彊烈地激髮同種混閤淋巴細胞增殖.結論:得到瞭一群較高程度錶達CD83、CD86和HLA-DR分子、體外可彊烈激髮同種異體T淋巴細胞增殖的樹突狀細胞群.
목적:체외분리배양병감정인외주혈수돌상세포,병관찰기항원정체공능.방법:실험우2005-05/2006-11재남방의과대학남방의원종류중심생물치료실험실완성.종인류백세포항원A2표체양성적건강인외주혈중분리획득단개핵세포.배양5 h후세조첩벽세포,가입함유10%인AB혈청적RPMI1640배양기,급중조인립세포-거서세포집락자격인자화중조인백세포개소4,우배양적제1,3,6천대수돌상세포적형태、표형진행분석,병정기검측수돌상세포적순도여득솔.추취여이상수돌상세포불동래원적기타건강인외주혈.경림파세포분리액분리후,획취비첩벽세포,용함10%인AB혈청적1640배양기중현,가입백세포개소2계속부육6 d,작위동충이체T림파세포.장수돌상세포분위량조,일조안상규방법배양6 d,령일조재배양지제5천시가입흑색소류항원기인A3편마적다태계속배양24 h.재경자외선처리후적96공판중,분별가입수돌상세포현액1×104,5×103,2×103,1×103세포/매공,이자신T림파세포작위대조,매공설3개복공,분별가입1×105림파세포/매공.평개수돌상세포자격T림파세포증식적능력.결과:①단개핵세포체외배양지제6천,가획득대량、90.81%고순도적수돌상세포,능구교고지표체21.8%CD1a、99.0%HLA-DR、63.4%CD80、18.9%CD83화80.6%CD86.②장유도배양6 d획득적량조수돌상세포작위자격세포,이불동적농도여동충이체림파세포혼합,균가산생증식반응;경과흑색소류항원기인A3편마적다태처리적각충비례적수돌상세포,교상응미경흑색소류항원기인A3편마적다태처리적수돌상세포격발림파세포증식적능력명현증강,농도상대교고적수돌상세포자격효과최명현,능구강렬지격발동충혼합림파세포증식.결론:득도료일군교고정도표체CD83、CD86화HLA-DR분자、체외가강렬격발동충이체T림파세포증식적수돌상세포군.
