遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2011年
5期
527-532
,共6页
张鹏%杨珍珍%窦红伟%李伟杭%律波%Bolund Lars%杜玉涛%谭萍萍%马润林
張鵬%楊珍珍%竇紅偉%李偉杭%律波%Bolund Lars%杜玉濤%譚萍萍%馬潤林
장붕%양진진%두홍위%리위항%률파%Bolund Lars%두옥도%담평평%마윤림
手工克隆%体细胞核移植%绿色荧光蛋白%克隆胚胎
手工剋隆%體細胞覈移植%綠色熒光蛋白%剋隆胚胎
수공극륭%체세포핵이식%록색형광단백%극륭배태
通过体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)培育转基因动物新个体是当前被广泛使用的技术之一,但其生产成本高和转基因囊胚形成率低在很大程度上制约了该技术的应用.文章报告对该技术的一些改进以提高其成功率并降低成本.首先将增强型绿色荧光基因(EGFP)导入猪胎儿成纤维细胞中,通过荧光观察EGFP的表达来筛选适合做细胞核移植的体细胞.这样避免了外源EGFP基因虽已整合至猪基因组但不表达的情况,保证供体细胞100%是表达目标蛋白(绿色荧光蛋白)的细胞;然后利用新一代体细胞核移植技术--寻工克隆技术(Handmade cloning,HMC)将供体细胞与卵母细胞融合生产胚胎.共收集了4个批次378个肉用家猪的卵母细胞,经体外培养成熟后手工去核得到266个去核卵母细胞,与EGFP细胞融合后获得127个重构胚胎,将重构胚胎体外培养到144 h,得到转基因囊胚65个,平均囊胚率为52.1±8.3%.与传统SCNT相比,HMC不仅操作简便,而且能大幅提高核移植细胞的囊胚率.更为重要的是,改进的手工克隆技术摆脱了昂贵的显微操作仪,为产业化生产转基因动物提供了新的实用基础.
通過體細胞覈移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)培育轉基因動物新箇體是噹前被廣汎使用的技術之一,但其生產成本高和轉基因囊胚形成率低在很大程度上製約瞭該技術的應用.文章報告對該技術的一些改進以提高其成功率併降低成本.首先將增彊型綠色熒光基因(EGFP)導入豬胎兒成纖維細胞中,通過熒光觀察EGFP的錶達來篩選適閤做細胞覈移植的體細胞.這樣避免瞭外源EGFP基因雖已整閤至豬基因組但不錶達的情況,保證供體細胞100%是錶達目標蛋白(綠色熒光蛋白)的細胞;然後利用新一代體細胞覈移植技術--尋工剋隆技術(Handmade cloning,HMC)將供體細胞與卵母細胞融閤生產胚胎.共收集瞭4箇批次378箇肉用傢豬的卵母細胞,經體外培養成熟後手工去覈得到266箇去覈卵母細胞,與EGFP細胞融閤後穫得127箇重構胚胎,將重構胚胎體外培養到144 h,得到轉基因囊胚65箇,平均囊胚率為52.1±8.3%.與傳統SCNT相比,HMC不僅操作簡便,而且能大幅提高覈移植細胞的囊胚率.更為重要的是,改進的手工剋隆技術襬脫瞭昂貴的顯微操作儀,為產業化生產轉基因動物提供瞭新的實用基礎.
통과체세포핵이식(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)배육전기인동물신개체시당전피엄범사용적기술지일,단기생산성본고화전기인낭배형성솔저재흔대정도상제약료해기술적응용.문장보고대해기술적일사개진이제고기성공솔병강저성본.수선장증강형록색형광기인(EGFP)도입저태인성섬유세포중,통과형광관찰EGFP적표체래사선괄합주세포핵이식적체세포.저양피면료외원EGFP기인수이정합지저기인조단불표체적정황,보증공체세포100%시표체목표단백(록색형광단백)적세포;연후이용신일대체세포핵이식기술--심공극륭기술(Handmade cloning,HMC)장공체세포여란모세포융합생산배태.공수집료4개비차378개육용가저적란모세포,경체외배양성숙후수공거핵득도266개거핵란모세포,여EGFP세포융합후획득127개중구배태,장중구배태체외배양도144 h,득도전기인낭배65개,평균낭배솔위52.1±8.3%.여전통SCNT상비,HMC불부조작간편,이차능대폭제고핵이식세포적낭배솔.경위중요적시,개진적수공극륭기술파탈료앙귀적현미조작의,위산업화생산전기인동물제공료신적실용기출.
