中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2012年
1期
46-50
,共5页
吴亮%姜旭淦%李礼%鞠爱萍%傅行礼%陈盛霞%周红
吳亮%薑旭淦%李禮%鞠愛萍%傅行禮%陳盛霞%週紅
오량%강욱감%리례%국애평%부행례%진성하%주홍
弓形虫%FABZ%原核表达
弓形蟲%FABZ%原覈錶達
궁형충%FABZ%원핵표체
目的 构建刚地弓形虫β-酮脂酰ACP合成酶(FABZ)原核表达质粒并在大肠杆菌中表达,建立检测和定位虫体FABZ蛋白表达的方法.方法 运用RT-PCR技术扩增弓形虫RH株速殖子fabz基因,克隆至pET32a(+)载体,在大肠杆菌Rosetta中诱导表达.Ni-NTA亲合层析柱纯化重组FABZ蛋白并制备其兔多克隆抗体.采用免疫印迹(Western blotting)技术和间接免疫荧光技术(IFA)检测和定位FABZ在虫体内表达.结果 成功表达重组FABZ蛋白,并制备其多克隆抗体.Western blotting技术检测出虫体转运肽型FABZ蛋白(t-FABZ)和成熟型FABZ蛋白(m-FABZ),IFA技术检测出分布于核周内质网和顶质体的FABZ蛋白.结论 通过制备多克隆抗体,用Western blotting技术和IFA技术能检测和定位FABZ蛋白在虫体内表达,该方法在顶质体蛋白研究中具有较高的应用价值.
目的 構建剛地弓形蟲β-酮脂酰ACP閤成酶(FABZ)原覈錶達質粒併在大腸桿菌中錶達,建立檢測和定位蟲體FABZ蛋白錶達的方法.方法 運用RT-PCR技術擴增弓形蟲RH株速殖子fabz基因,剋隆至pET32a(+)載體,在大腸桿菌Rosetta中誘導錶達.Ni-NTA親閤層析柱純化重組FABZ蛋白併製備其兔多剋隆抗體.採用免疫印跡(Western blotting)技術和間接免疫熒光技術(IFA)檢測和定位FABZ在蟲體內錶達.結果 成功錶達重組FABZ蛋白,併製備其多剋隆抗體.Western blotting技術檢測齣蟲體轉運肽型FABZ蛋白(t-FABZ)和成熟型FABZ蛋白(m-FABZ),IFA技術檢測齣分佈于覈週內質網和頂質體的FABZ蛋白.結論 通過製備多剋隆抗體,用Western blotting技術和IFA技術能檢測和定位FABZ蛋白在蟲體內錶達,該方法在頂質體蛋白研究中具有較高的應用價值.
목적 구건강지궁형충β-동지선ACP합성매(FABZ)원핵표체질립병재대장간균중표체,건립검측화정위충체FABZ단백표체적방법.방법 운용RT-PCR기술확증궁형충RH주속식자fabz기인,극륭지pET32a(+)재체,재대장간균Rosetta중유도표체.Ni-NTA친합층석주순화중조FABZ단백병제비기토다극륭항체.채용면역인적(Western blotting)기술화간접면역형광기술(IFA)검측화정위FABZ재충체내표체.결과 성공표체중조FABZ단백,병제비기다극륭항체.Western blotting기술검측출충체전운태형FABZ단백(t-FABZ)화성숙형FABZ단백(m-FABZ),IFA기술검측출분포우핵주내질망화정질체적FABZ단백.결론 통과제비다극륭항체,용Western blotting기술화IFA기술능검측화정위FABZ단백재충체내표체,해방법재정질체단백연구중구유교고적응용개치.
