中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2012年
1期
1-5
,共5页
李文娟%张亮%邓婧%金戈%黄荣忠%房亮%谢鹏
李文娟%張亮%鄧婧%金戈%黃榮忠%房亮%謝鵬
리문연%장량%산청%금과%황영충%방량%사붕
博尔纳病病毒%核蛋白%磷蛋白%星形胶质细胞%质粒
博爾納病病毒%覈蛋白%燐蛋白%星形膠質細胞%質粒
박이납병병독%핵단백%린단백%성형효질세포%질립
目的 构建星形胶质细胞特异性表达的博尔纳病病毒磷蛋白和核蛋白基因重组质粒,以供后续实验研究使用.方法 用PCR方法扩增BDV p24和p40基因完整序列同时加入Nhe Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点,将所得目的片段克隆至pMD18-T载体,再通过酶切连接将其连接至pCMvie-GFAP质粒中的GFAP启动子的下游,分别得到p24和p40重组质粒.用酶切、PCR以及测序3种方法鉴定重组质粒,并将质粒转染人胶质瘤细胞株(U251),采用免疫细胞化学方法检测目的蛋白表达.结果 pCMvie-GFAP-BDVp24和pCMvie-GFAP-BDVp40重组质粒经酶切、PCR鉴定可见目的条带位置与预期相符,经测序可见插入序列正确,质粒转染U251细胞后,经免疫细胞化学检测到目的蛋白表达.结论 成功构建了pCMvie-GFAP-BDVp24和pCMvie-GFAP-BDVp40星形胶质细胞特异性表达质粒,为研究这两种病毒蛋白的致病机制及其对星形胶质细胞的影响提供了工具.
目的 構建星形膠質細胞特異性錶達的博爾納病病毒燐蛋白和覈蛋白基因重組質粒,以供後續實驗研究使用.方法 用PCR方法擴增BDV p24和p40基因完整序列同時加入Nhe Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位點,將所得目的片段剋隆至pMD18-T載體,再通過酶切連接將其連接至pCMvie-GFAP質粒中的GFAP啟動子的下遊,分彆得到p24和p40重組質粒.用酶切、PCR以及測序3種方法鑒定重組質粒,併將質粒轉染人膠質瘤細胞株(U251),採用免疫細胞化學方法檢測目的蛋白錶達.結果 pCMvie-GFAP-BDVp24和pCMvie-GFAP-BDVp40重組質粒經酶切、PCR鑒定可見目的條帶位置與預期相符,經測序可見插入序列正確,質粒轉染U251細胞後,經免疫細胞化學檢測到目的蛋白錶達.結論 成功構建瞭pCMvie-GFAP-BDVp24和pCMvie-GFAP-BDVp40星形膠質細胞特異性錶達質粒,為研究這兩種病毒蛋白的緻病機製及其對星形膠質細胞的影響提供瞭工具.
목적 구건성형효질세포특이성표체적박이납병병독린단백화핵단백기인중조질립,이공후속실험연구사용.방법 용PCR방법확증BDV p24화p40기인완정서렬동시가입Nhe Ⅰ화EcoR Ⅰ매절위점,장소득목적편단극륭지pMD18-T재체,재통과매절련접장기련접지pCMvie-GFAP질립중적GFAP계동자적하유,분별득도p24화p40중조질립.용매절、PCR이급측서3충방법감정중조질립,병장질립전염인효질류세포주(U251),채용면역세포화학방법검측목적단백표체.결과 pCMvie-GFAP-BDVp24화pCMvie-GFAP-BDVp40중조질립경매절、PCR감정가견목적조대위치여예기상부,경측서가견삽입서렬정학,질립전염U251세포후,경면역세포화학검측도목적단백표체.결론 성공구건료pCMvie-GFAP-BDVp24화pCMvie-GFAP-BDVp40성형효질세포특이성표체질립,위연구저량충병독단백적치병궤제급기대성형효질세포적영향제공료공구.
