中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2012年
6期
1034-1038
,共5页
王通%马文心%郭嘉慧%陈智鹏%崔毅峙
王通%馬文心%郭嘉慧%陳智鵬%崔毅峙
왕통%마문심%곽가혜%진지붕%최의치
重组腺病毒%HIV包膜蛋白质gp120%骨髓来源巨噬细胞
重組腺病毒%HIV包膜蛋白質gp120%骨髓來源巨噬細胞
중조선병독%HIV포막단백질gp120%골수래원거서세포
目的:构建携带中国株HIV-1 gp120基因并可感染小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMM)的重组腺病毒.方法:利用AdMax腺病毒构建系统,以双质粒共转染人胚肾转化细胞293Ad5+细胞,完成重组腺病毒载体包装,并进一步扩增和纯化.通过ELISA测定gp120的蛋白产量,以确认目的基因重组与表达成功.以Karber法对病毒进行TCID50滴度测定,利用BMM进行感染复数(MOI)流式细胞术测定,并利用荧光显微镜观察细胞活化形态.结果:成功构建AdMax-HIV-1 gp120(简称Ad-gp120)及其对照病毒(Ad-GFP),其滴度分别为108.3和108.1 TCID50/mL.这些病毒可感染BMM,MOI测定结果表明2种重组腺病毒感染BMM和293Ad5+细胞的能力接近,验证了上述TCID50滴度结果.Ad-gp120可在293Ad5+细胞中表达gp120蛋白,并可感染和诱导BMM相关形态改变.结论:成功构建Ad-gp120,其感染可致BMM出现形态发生改变.
目的:構建攜帶中國株HIV-1 gp120基因併可感染小鼠骨髓來源巨噬細胞(BMM)的重組腺病毒.方法:利用AdMax腺病毒構建繫統,以雙質粒共轉染人胚腎轉化細胞293Ad5+細胞,完成重組腺病毒載體包裝,併進一步擴增和純化.通過ELISA測定gp120的蛋白產量,以確認目的基因重組與錶達成功.以Karber法對病毒進行TCID50滴度測定,利用BMM進行感染複數(MOI)流式細胞術測定,併利用熒光顯微鏡觀察細胞活化形態.結果:成功構建AdMax-HIV-1 gp120(簡稱Ad-gp120)及其對照病毒(Ad-GFP),其滴度分彆為108.3和108.1 TCID50/mL.這些病毒可感染BMM,MOI測定結果錶明2種重組腺病毒感染BMM和293Ad5+細胞的能力接近,驗證瞭上述TCID50滴度結果.Ad-gp120可在293Ad5+細胞中錶達gp120蛋白,併可感染和誘導BMM相關形態改變.結論:成功構建Ad-gp120,其感染可緻BMM齣現形態髮生改變.
목적:구건휴대중국주HIV-1 gp120기인병가감염소서골수래원거서세포(BMM)적중조선병독.방법:이용AdMax선병독구건계통,이쌍질립공전염인배신전화세포293Ad5+세포,완성중조선병독재체포장,병진일보확증화순화.통과ELISA측정gp120적단백산량,이학인목적기인중조여표체성공.이Karber법대병독진행TCID50적도측정,이용BMM진행감염복수(MOI)류식세포술측정,병이용형광현미경관찰세포활화형태.결과:성공구건AdMax-HIV-1 gp120(간칭Ad-gp120)급기대조병독(Ad-GFP),기적도분별위108.3화108.1 TCID50/mL.저사병독가감염BMM,MOI측정결과표명2충중조선병독감염BMM화293Ad5+세포적능력접근,험증료상술TCID50적도결과.Ad-gp120가재293Ad5+세포중표체gp120단백,병가감염화유도BMM상관형태개변.결론:성공구건Ad-gp120,기감염가치BMM출현형태발생개변.
