CAJ | 학술논문

目的观察树突状细胞(DC)联合曲妥单抗负载人类表皮生长因子受体2(Her-2+)凋亡乳腺癌细胞抗原后,诱发免疫效应细胞产生的特异性抗乳腺癌免疫应答.方法用GM-CSF、IL-4和TNFα受体从人外周血单个核细胞中诱导DC,将DC与包被曲妥单抗的凋亡SKBr3细胞共培养,7 d后获得成熟DC,用成熟DC联合CD3单抗和IL-2等细胞因子诱导杀伤细胞(DC-CIK).在倒置相差显微镜和透射电子显微镜下观察DC形态和超微结构变化,用流式细胞术检测DC表达CD14、CD1a、CD64、CD80、CD83、CD86、人类白细胞抗原ABC(HLA-ABC)和HLA-DR的情况.用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测释放抗原特异性γ受体(IFNγ)的T细胞数.以二甲基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测DC-CIK的细胞毒活性.结果在曲妥单抗包被的SKBr3凋亡细胞中加入DC(DC2组),5 min即可看到DC特异性结合在SKBr3细胞周围;48 h后,透射电镜下可见DC的胞浆中有多个被膜包裹着的凋亡靶细胞器,靶细胞器呈降解状态,而未加曲妥单抗组(DC0组)DC中这种降解细胞器相对较少.DC0、DC1和DC2组60.0%以上的DC均表达IgG的高亲和力受体(FcγRI或CD64),联合曲妥单抗组DC表达CD14较低,高表达HLA-DR和HLA-ABC,CD1a、CD80、CD83和CD86表达明显高于未成熟DC组(P＜0.05),ELISPOT检测证实,联合曲妥单抗组中的抗原特异性T细胞斑点数明显高于DC0组(P＜0.05).负载SKBr3细胞抗原的DC-CIK细胞对SKBr3的杀伤活性是CIK细胞的1.7倍.结论 DC联合曲妥单抗捕获SKBr3细胞抗原后,可明显提高DC-CIK细胞对SKBr3的细胞毒活性,有利于进一步探讨人源化抗体、DC疫苗和免疫效应细胞等免疫治疗手段的联合应用.
목적 관찰수돌상세포(DC)연합곡타단항부재인류표피생장인자수체2(Her-2+)조망유선암세포항원후,유발면역효응세포산생적특이성항유선암면역응답.방법 용GM-CSF、IL-4화TNFα수체종인외주혈단개핵세포중유도DC,장DC여포피곡타단항적조망SKBr3세포공배양,7 d후획득성숙DC,용성숙DC연합CD3단항화IL-2등세포인자유도살상세포(DC-CIK).재도치상차현미경화투사전자현미경하관찰DC형태화초미결구변화,용류식세포술검측DC표체CD14、CD1a、CD64、CD80、CD83、CD86、인류백세포항원ABC(HLA-ABC)화HLA-DR적정황.용매련면역반점법(ELISPOT)검측석방항원특이성γ수체(IFNγ)적T세포수.이이갑기추화사담서람(MTT)법검측DC-CIK적세포독활성.결과 재곡타단항포피적SKBr3조망세포중가입DC(DC2조),5 min즉가간도DC특이성결합재SKBr3세포주위;48 h후,투사전경하가견DC적포장중유다개피막포과착적조망파세포기,파세포기정강해상태,이미가곡타단항조(DC0조)DC중저충강해세포기상대교소.DC0、DC1화DC2조60.0%이상적DC균표체IgG적고친화력수체(FcγRI혹CD64),연합곡타단항조DC표체CD14교저,고표체HLA-DR화HLA-ABC,CD1a、CD80、CD83화CD86표체명현고우미성숙DC조(P＜0.05),ELISPOT검측증실,연합곡타단항조중적항원특이성T세포반점수명현고우DC0조(P＜0.05).부재SKBr3세포항원적DC-CIK세포대SKBr3적살상활성시CIK세포적1.7배.결론 DC연합곡타단항포획SKBr3세포항원후,가명현제고DC-CIK세포대SKBr3적세포독활성,유리우진일보탐토인원화항체、DC역묘화면역효응세포등면역치료수단적연합응용.