科学通报
科學通報
과학통보
CHINESE SCIENCE BULLETIN
2003年
14期
1524-1529
,共6页
贺雨虹%李湘辉%王福%薛毅%隋森芳
賀雨虹%李湘輝%王福%薛毅%隋森芳
하우홍%리상휘%왕복%설의%수삼방
突触结合蛋白Ⅰ 磷脂单层膜 临界插膜压 免疫染色 Western blot
突觸結閤蛋白Ⅰ 燐脂單層膜 臨界插膜壓 免疫染色 Western blot
돌촉결합단백Ⅰ 린지단층막 림계삽막압 면역염색 Western blot
突触结合蛋白(synaptotagmin)Ⅰ是神经细胞突触囊泡上的一个膜整合蛋白, C2A是它的具有重要功能的近膜胞质片段. 近年来的研究表明, 突触结合蛋白Ⅰ在Ca2+引发的神经递质快速释放过程中起到Ca2+感受器的作用, 而C2A结构域与神经细胞的突触前膜的相互作用与其 Ca2+感受器的功能密切相关, 但是其作用机制还不清楚. 利用气/液单层膜技术结合表面密度的测量, 发现C2A存在两种膜结合状态: 无 Ca2+时, 以静电作用力为主的表面吸附状态; 有 Ca2+时, 静电力起部分作用的插膜状态. 两种状态时C2A都倾向于与带负电荷, 如磷脂酰丝氨酸的磷脂膜结合. 将C2A转染表达在PC12和HEK-293细胞中, 利用免疫染色和Western blot检测也表明, C2A在有无Ca2+存在的情况下都主要存在于膜附近. 实验结果提示, 突触结合蛋白Ⅰ作为Ca2+感受器的可能分子机制: 突触结合蛋白Ⅰ的C2A的表面吸附功能在囊泡锚定或活化时协助囊泡附着在活化区, 当细胞内Ca2+浓度迅速增加, C2A Ca2+依赖的插入负电荷膜的特点可以将囊泡拉近突触前膜, 加之同时和其他蛋白, 如SNARE复合物的作用引发膜的融合.
突觸結閤蛋白(synaptotagmin)Ⅰ是神經細胞突觸囊泡上的一箇膜整閤蛋白, C2A是它的具有重要功能的近膜胞質片段. 近年來的研究錶明, 突觸結閤蛋白Ⅰ在Ca2+引髮的神經遞質快速釋放過程中起到Ca2+感受器的作用, 而C2A結構域與神經細胞的突觸前膜的相互作用與其 Ca2+感受器的功能密切相關, 但是其作用機製還不清楚. 利用氣/液單層膜技術結閤錶麵密度的測量, 髮現C2A存在兩種膜結閤狀態: 無 Ca2+時, 以靜電作用力為主的錶麵吸附狀態; 有 Ca2+時, 靜電力起部分作用的插膜狀態. 兩種狀態時C2A都傾嚮于與帶負電荷, 如燐脂酰絲氨痠的燐脂膜結閤. 將C2A轉染錶達在PC12和HEK-293細胞中, 利用免疫染色和Western blot檢測也錶明, C2A在有無Ca2+存在的情況下都主要存在于膜附近. 實驗結果提示, 突觸結閤蛋白Ⅰ作為Ca2+感受器的可能分子機製: 突觸結閤蛋白Ⅰ的C2A的錶麵吸附功能在囊泡錨定或活化時協助囊泡附著在活化區, 噹細胞內Ca2+濃度迅速增加, C2A Ca2+依賴的插入負電荷膜的特點可以將囊泡拉近突觸前膜, 加之同時和其他蛋白, 如SNARE複閤物的作用引髮膜的融閤.
돌촉결합단백(synaptotagmin)Ⅰ시신경세포돌촉낭포상적일개막정합단백, C2A시타적구유중요공능적근막포질편단. 근년래적연구표명, 돌촉결합단백Ⅰ재Ca2+인발적신경체질쾌속석방과정중기도Ca2+감수기적작용, 이C2A결구역여신경세포적돌촉전막적상호작용여기 Ca2+감수기적공능밀절상관, 단시기작용궤제환불청초. 이용기/액단층막기술결합표면밀도적측량, 발현C2A존재량충막결합상태: 무 Ca2+시, 이정전작용력위주적표면흡부상태; 유 Ca2+시, 정전력기부분작용적삽막상태. 량충상태시C2A도경향우여대부전하, 여린지선사안산적린지막결합. 장C2A전염표체재PC12화HEK-293세포중, 이용면역염색화Western blot검측야표명, C2A재유무Ca2+존재적정황하도주요존재우막부근. 실험결과제시, 돌촉결합단백Ⅰ작위Ca2+감수기적가능분자궤제: 돌촉결합단백Ⅰ적C2A적표면흡부공능재낭포묘정혹활화시협조낭포부착재활화구, 당세포내Ca2+농도신속증가, C2A Ca2+의뢰적삽입부전하막적특점가이장낭포랍근돌촉전막, 가지동시화기타단백, 여SNARE복합물적작용인발막적융합.
