CAJ | 학술논문

目的探讨人巨细胞病毒( human cytomegalovirus, HCMV)感染的人胚肺成纤维上皮细胞( human embryo lung fibroblast, HEL)细胞周期素 E (cyclin E)、 D (cyclin D)、 A (cyclin A)、 B (cyclin B)表达的改变与细胞病变的关系.方法建立体外 HCMV感染细胞膜型,观察感染细胞感染 12、 48h后细胞病变( cytopathologic effects, CPE);并在相同时间点收获细胞,用乙醇固定 HCMV感染的宿主细胞后用 PI染色,经流式细胞术( FACSVantage)根据细胞 DNA倍性分选出 G1、 S、 G2/M期细胞,然后分别取等量细胞裂解, 用 Western blot分析上面各不同时相细胞中 cyclins的表达.结果 ①培养 12h,仅病毒感染组在电镜可观察到细胞肿胀,其余各组未见明显病变;②培养 48h,与 HCMV169感染组相比,药物干预 HCMV169感染 HEL两组细胞中,光镜及电镜 CPE程度较轻,正常组细胞无 CPE;③乙醇固定细胞经流式细胞术分选,感染 12、 48h细胞均以 G1为主,少见 S期细胞、未见 G2期和 M期的细胞,与正常对照组比较有显著差异( P< 0.05);根据细胞 DNA倍性分选出的各期细胞裂解行 Western blot检测,正常细胞未检测到 cyclins,感染细胞中 cyclin E、 cyclin D有明显表达,未见 cyclin A、 cyclin B的表达.④ Western blot对分选后的感染细胞中 cyclin E、 cyclin D表达的检测与流式细胞术分析的结果一致.结论体外 HCMV感染细胞细胞周期进程受阻与细胞病变关系密切,细胞周期进程异常可能是导致细胞病变的病理学基础.
목적탐토인거세포병독( human cytomegalovirus, HCMV)감염적인배폐성섬유상피세포( human embryo lung fibroblast, HEL)세포주기소 E (cyclin E)、 D (cyclin D)、 A (cyclin A)、 B (cyclin B)표체적개변여세포병변적관계.방법건입체외 HCMV감염세포막형,관찰감염세포감염 12、 48h후세포병변( cytopathologic effects, CPE);병재상동시간점수획세포,용을순고정 HCMV감염적숙주세포후용 PI염색,경류식세포술( FACSVantage)근거세포 DNA배성분선출 G1、 S、 G2/M기세포,연후분별취등량세포렬해, 용 Western blot분석상면각불동시상세포중 cyclins적표체.결과 ①배양 12h,부병독감염조재전경가관찰도세포종창,기여각조미견명현병변;②배양 48h,여 HCMV169감염조상비,약물간예 HCMV169감염 HEL량조세포중,광경급전경 CPE정도교경,정상조세포무 CPE;③을순고정세포경류식세포술분선,감염 12、 48h세포균이 G1위주,소견 S기세포、미견 G2기화 M기적세포,여정상대조조비교유현저차이( P< 0.05);근거세포 DNA배성분선출적각기세포렬해행 Western blot검측,정상세포미검측도 cyclins,감염세포중 cyclin E、 cyclin D유명현표체,미견 cyclin A、 cyclin B적표체.④ Western blot대분선후적감염세포중 cyclin E、 cyclin D표체적검측여류식세포술분석적결과일치.결론체외 HCMV감염세포세포주기진정수조여세포병변관계밀절,세포주기진정이상가능시도치세포병변적병이학기출.