上海第二医科大学学报
上海第二醫科大學學報
상해제이의과대학학보
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINALIS SECONDAE SHANGHAI
2005年
2期
107-111
,共5页
尤汉宁%袁汉英%吕红%高卜渝%陈源文%李育阳%李定国
尤漢寧%袁漢英%呂紅%高蔔渝%陳源文%李育暘%李定國
우한저%원한영%려홍%고복투%진원문%리육양%리정국
人卵泡抑素%毕赤氏巴斯德酵母工程菌%基因表达
人卵泡抑素%畢赤氏巴斯德酵母工程菌%基因錶達
인란포억소%필적씨파사덕효모공정균%기인표체
目的在P.pastoris中分泌表达人卵泡抑素基因.方法采用PCR法扩增目的基因FS288片段,将其亚克隆入pPIC9,构建pPIC9-FS288,DNA序列测定验证后,将pPIC9-FS288采用BamHⅠ和SalⅠ双酶切,回收小片段,连接pPIC9K,构建重组分泌型表达载体pPIC9K-FS288,电穿孔法转化SMD1168,G418筛选多拷贝转化子,转化子发酵后,取上清液进行SDS-PAGE和Western blot检测重组蛋白表达.结果成功构建了重组分泌型表达载体pPIC9K-FS288和工程菌株SMD1168-FS288,SDS-PGAE显示工程菌发酵上清液在50 000 ～ 60 000处有弥散条带,并且与Western blot结果相符.结论工程菌SMD1168-FS288能分泌表达重组人卵泡抑素.
目的在P.pastoris中分泌錶達人卵泡抑素基因.方法採用PCR法擴增目的基因FS288片段,將其亞剋隆入pPIC9,構建pPIC9-FS288,DNA序列測定驗證後,將pPIC9-FS288採用BamHⅠ和SalⅠ雙酶切,迴收小片段,連接pPIC9K,構建重組分泌型錶達載體pPIC9K-FS288,電穿孔法轉化SMD1168,G418篩選多拷貝轉化子,轉化子髮酵後,取上清液進行SDS-PAGE和Western blot檢測重組蛋白錶達.結果成功構建瞭重組分泌型錶達載體pPIC9K-FS288和工程菌株SMD1168-FS288,SDS-PGAE顯示工程菌髮酵上清液在50 000 ～ 60 000處有瀰散條帶,併且與Western blot結果相符.結論工程菌SMD1168-FS288能分泌錶達重組人卵泡抑素.
목적재P.pastoris중분비표체인란포억소기인.방법채용PCR법확증목적기인FS288편단,장기아극륭입pPIC9,구건pPIC9-FS288,DNA서렬측정험증후,장pPIC9-FS288채용BamHⅠ화SalⅠ쌍매절,회수소편단,련접pPIC9K,구건중조분비형표체재체pPIC9K-FS288,전천공법전화SMD1168,G418사선다고패전화자,전화자발효후,취상청액진행SDS-PAGE화Western blot검측중조단백표체.결과성공구건료중조분비형표체재체pPIC9K-FS288화공정균주SMD1168-FS288,SDS-PGAE현시공정균발효상청액재50 000 ～ 60 000처유미산조대,병차여Western blot결과상부.결론공정균SMD1168-FS288능분비표체중조인란포억소.
