CAJ | 학술논문

目的: 在毕赤酵母中表达血管基膜衍生多功能肽(vascular basement membrane-derived mulifunctional peptide,VBMDMP),并鉴定其生物学活性.方法: 利用PCR技术获得融合了谷胱甘肽转移酶(GST)的肿瘤抑素(tumstatin)活性成分的GST-VBMDMP基因,克隆到pPIC9K载体;然后原生质体转化法转化毕赤酵母细胞,行多克隆筛选和表型鉴定.获得His+Muts表型的转化子,在MGY培养液中30 ℃摇床培养,每24 h从培养液中转移1 ml培养液上清于-70 ℃保存,并保持培养瓶中培养液的量和培养液中甲醇0.5%的浓度不变,第9天行SDS-PAGE检测表达的蛋白并纯化,然后进行细胞和动物生物活性检测.结果: SDS-PAGE发现阳性重组子在MGY培养液中表达的蛋白量在1～7 d逐渐增加,到第8天后开始减少,用Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化获得GST-VBMDMP融合蛋白; GST-VBMDMP能抑制C57BL/6鼠动脉内皮细胞管状结构的形成;同时GST-VBMDMP( 2 、6 、10 mg/kg)对小鼠Lewis肺癌原发瘤(瘤重抑制率分别为96.6%、82.1%、61.2%)和自发性肺转移瘤(瘤结节抑制率分别为96.8 %、87.9%、75.3%)均具有明显的抑制作用(P＜0.01).结论:VBMDMP能够抑制鼠动脉内皮细胞管状结构的形成,并对小鼠Lewis肺癌原发瘤和肺转移具有明显的抑制作用.
목적: 재필적효모중표체혈관기막연생다공능태(vascular basement membrane-derived mulifunctional peptide,VBMDMP),병감정기생물학활성.방법: 이용PCR기술획득융합료곡광감태전이매(GST)적종류억소(tumstatin)활성성분적GST-VBMDMP기인,극륭도pPIC9K재체;연후원생질체전화법전화필적효모세포,행다극륭사선화표형감정.획득His+Muts표형적전화자,재MGY배양액중30 ℃요상배양,매24 h종배양액중전이1 ml배양액상청우-70 ℃보존,병보지배양병중배양액적량화배양액중갑순0.5%적농도불변,제9천행SDS-PAGE검측표체적단백병순화,연후진행세포화동물생물활성검측.결과: SDS-PAGE발현양성중조자재MGY배양액중표체적단백량재1～7 d축점증가,도제8천후개시감소,용Glutathione Sepharose 4B친화층석주순화획득GST-VBMDMP융합단백; GST-VBMDMP능억제C57BL/6서동맥내피세포관상결구적형성;동시GST-VBMDMP( 2 、6 、10 mg/kg)대소서Lewis폐암원발류(류중억제솔분별위96.6%、82.1%、61.2%)화자발성폐전이류(류결절억제솔분별위96.8 %、87.9%、75.3%)균구유명현적억제작용(P＜0.01).결론:VBMDMP능구억제서동맥내피세포관상결구적형성,병대소서Lewis폐암원발류화폐전이구유명현적억제작용.