CAJ | 학술논문

目的:观察大鼠白色脂肪组织作为内皮祖细胞来源的可能性.方法:实验于2004-12/2005-04在上海组织工程重点实验室完成.取3周龄Wistar大鼠腹股沟白色脂肪组织,消化法得到的细胞接种在培养皿内,用含体积分数为0.1的胎牛血清的DMEM培养基培养,传至第2代,应用免疫磁珠分选仪分选血管内皮生长因子受体阳性细胞.获得的细胞分诱导组(DMEM,体积分数为0.1的胎牛血清,血管内皮生长因子10μg/L,碱性成纤维细胞生长因子2μg/L)和非诱导组(DMEM,体积分数为0.1的胎牛血清)进行培养.流式细胞仪检测分选前后细胞纯度;噻唑蓝比色法检测诱导组与非诱导组细胞的生长曲线;相差倒置显微镜观察细胞形态;免疫细胞荧光检测细胞von Willebrand因子和血小板-内皮细胞间黏附分子-1的表达;荧光显微镜观察细胞摄取DiI-acLDL的功能;诱导组细胞接种于甲基纤维素半固体培养基进行三维培养,观察形成血管样结构的能力.结果:①细胞纯度:流式细胞仪检测显示未分选的第2代细胞血管内皮生长因子受体阳性率为(8.65±1.47)%,刚分选的血管内皮生长因子受体细胞阳性率(94.06±6.86)%,两者比较差异显著.分选前后的第2代细胞血小板-内皮细胞间黏附分子1阳性率分别为(1.26±0.21)%和(0.57±0.06)%,两者比较差异无显著性.②细胞生长曲线测定:诱导组细胞在诱导培养基中生长良好,第3天进入对数生长期,第6天到平台期.非诱导组细胞生长较慢,第5天进入对数生长期,第8天到平台期.第5天后各时间点差异均显著(P＜0.05).③细胞形态观察:培养12 d后,非诱导组细胞为梭形,而诱导组细胞呈"铺路石"样排列.④细胞免疫荧光检测:诱导培养12 d后诱导组细胞yon Willebrand因子和血小板-内皮细胞间黏附分子1为阳性,非诱导组细胞皆为阴性.⑤内皮细胞功能检测:诱导后12 d后的低密度脂蛋白摄取实验,诱导组细胞内出现红色荧光,非诱导组为阴性.⑥三维培养:诱导组细胞接种在甲基纤维素的半固体培养基内3 d后形成"树枝样"分叉结构,未诱导组细胞未形成此类结构.结论:大鼠脂肪组织来源的血管内皮生长因子受体阳性细胞能够诱导分化为成熟内皮细胞. 目的:觀察大鼠白色脂肪組織作為內皮祖細胞來源的可能性.方法:實驗于2004-12/2005-04在上海組織工程重點實驗室完成.取3週齡Wistar大鼠腹股溝白色脂肪組織,消化法得到的細胞接種在培養皿內,用含體積分數為0.1的胎牛血清的DMEM培養基培養,傳至第2代,應用免疫磁珠分選儀分選血管內皮生長因子受體暘性細胞.穫得的細胞分誘導組(DMEM,體積分數為0.1的胎牛血清,血管內皮生長因子10μg/L,堿性成纖維細胞生長因子2μg/L)和非誘導組(DMEM,體積分數為0.1的胎牛血清)進行培養.流式細胞儀檢測分選前後細胞純度;噻唑藍比色法檢測誘導組與非誘導組細胞的生長麯線;相差倒置顯微鏡觀察細胞形態;免疫細胞熒光檢測細胞von Willebrand因子和血小闆-內皮細胞間黏附分子-1的錶達;熒光顯微鏡觀察細胞攝取DiI-acLDL的功能;誘導組細胞接種于甲基纖維素半固體培養基進行三維培養,觀察形成血管樣結構的能力.結果:①細胞純度:流式細胞儀檢測顯示未分選的第2代細胞血管內皮生長因子受體暘性率為(8.65±1.47)%,剛分選的血管內皮生長因子受體細胞暘性率(94.06±6.86)%,兩者比較差異顯著.分選前後的第2代細胞血小闆-內皮細胞間黏附分子1暘性率分彆為(1.26±0.21)%和(0.57±0.06)%,兩者比較差異無顯著性.②細胞生長麯線測定:誘導組細胞在誘導培養基中生長良好,第3天進入對數生長期,第6天到平檯期.非誘導組細胞生長較慢,第5天進入對數生長期,第8天到平檯期.第5天後各時間點差異均顯著(P＜0.05).③細胞形態觀察:培養12 d後,非誘導組細胞為梭形,而誘導組細胞呈"鋪路石"樣排列.④細胞免疫熒光檢測:誘導培養12 d後誘導組細胞yon Willebrand因子和血小闆-內皮細胞間黏附分子1為暘性,非誘導組細胞皆為陰性.⑤內皮細胞功能檢測:誘導後12 d後的低密度脂蛋白攝取實驗,誘導組細胞內齣現紅色熒光,非誘導組為陰性.⑥三維培養:誘導組細胞接種在甲基纖維素的半固體培養基內3 d後形成"樹枝樣"分扠結構,未誘導組細胞未形成此類結構.結論:大鼠脂肪組織來源的血管內皮生長因子受體暘性細胞能夠誘導分化為成熟內皮細胞.
목적:관찰대서백색지방조직작위내피조세포래원적가능성.방법:실험우2004-12/2005-04재상해조직공정중점실험실완성.취3주령Wistar대서복고구백색지방조직,소화법득도적세포접충재배양명내,용함체적분수위0.1적태우혈청적DMEM배양기배양,전지제2대,응용면역자주분선의분선혈관내피생장인자수체양성세포.획득적세포분유도조(DMEM,체적분수위0.1적태우혈청,혈관내피생장인자10μg/L,감성성섬유세포생장인자2μg/L)화비유도조(DMEM,체적분수위0.1적태우혈청)진행배양.류식세포의검측분선전후세포순도;새서람비색법검측유도조여비유도조세포적생장곡선;상차도치현미경관찰세포형태;면역세포형광검측세포von Willebrand인자화혈소판-내피세포간점부분자-1적표체;형광현미경관찰세포섭취DiI-acLDL적공능;유도조세포접충우갑기섬유소반고체배양기진행삼유배양,관찰형성혈관양결구적능력.결과:①세포순도:류식세포의검측현시미분선적제2대세포혈관내피생장인자수체양성솔위(8.65±1.47)%,강분선적혈관내피생장인자수체세포양성솔(94.06±6.86)%,량자비교차이현저.분선전후적제2대세포혈소판-내피세포간점부분자1양성솔분별위(1.26±0.21)%화(0.57±0.06)%,량자비교차이무현저성.②세포생장곡선측정:유도조세포재유도배양기중생장량호,제3천진입대수생장기,제6천도평태기.비유도조세포생장교만,제5천진입대수생장기,제8천도평태기.제5천후각시간점차이균현저(P＜0.05).③세포형태관찰:배양12 d후,비유도조세포위사형,이유도조세포정"포로석"양배렬.④세포면역형광검측:유도배양12 d후유도조세포yon Willebrand인자화혈소판-내피세포간점부분자1위양성,비유도조세포개위음성.⑤내피세포공능검측:유도후12 d후적저밀도지단백섭취실험,유도조세포내출현홍색형광,비유도조위음성.⑥삼유배양:유도조세포접충재갑기섬유소적반고체배양기내3 d후형성"수지양"분차결구,미유도조세포미형성차류결구.결론:대서지방조직래원적혈관내피생장인자수체양성세포능구유도분화위성숙내피세포.